Immune reconstitution against cytomegalovirus in allogeneic hematopoietic stem cell transplant recipients

El trasplante alogénico de precursores hematopoyéticos (alo-TPH) constituye una de las herramientas terapéuticas más efectivas para el tratamiento de distintas enfermedades hematológicas. Durante este proceso, los pacientes se ven sometidos a prolongados períodos de inmunosupresión en los cuales son susceptibles a desarrollar diversas infecciones, siendo la infección por citomegalovirus (CMV) una de las más importantes. Existen datos previos que sugieren que la presencia de linfocitos T-CD8+ anti-CMV protege de la reactivación de CMV. La elección de una tecnología estándar para monitorizar la respuesta inmune específica frente a CMV en estos pacientes puede ayudarnos a predecir la respuesta frente CMV de cada paciente y como consecuencia, realizar un tratamiento antiviral personalizado. Además, la caracterización ex vivo de las células T-CD4+ anti-CMV en individuos sanos puede ayudarnos a entender el papel que juegan en el control de la reactivación de CMV antes de incorporarlo en la monitorización de los pacientes. En esta tesis, por un lado, se han optimizado dos tecnologías multiméricas con el objetivo de seleccionar la mejor estrategia para su incorporación en la monitorización clínica de la respuesta inmune frente a CMV en pacientes sometidos a alo-TPH. Se ha demostrado que la tecnología basada en estreptámero es preferible para la monitorización de la respuesta inmune antígeno-específica ex vivo ya que proporciona valores más precisos, exactos y específicos que la técnica de los pentámeros. Asimismo, ofrecen la posibilidad de su uso en inmunoterapia adoptiva. A continuación, se ha monitorizado la recuperación inmune CD8+ anti-CMV en 25 pacientes sometidos a alo-TPH con la tecnología del estreptámero (ex vivo) además de analizar su funcionalidad a través la producción in vitro de IFN¿ mediante el uso de la citometría de flujo. Con estos análisis hemos visto que es posible monitorizar la respuesta CD8+ específica con el estreptámero y que el número de células no previene de la reactivación de CMV, sino que es la capacidad de respuesta bien por ser funcionales en períodos tempranos post-trasplante o la capacidad de expandir estas células CD8+ anti-CMV tras la reactivación lo que protege de la reactivación y ayuda en la terapia antiviral. Por otro lado, hemos querido profundizar en la caracterización fenotípica de los linfocitos T CD4+ anti-CMV mediante marcaje ex vivo con tetrámeros ya que estudios previos demuestran mediante técnicas in vitro su papel protector frente a reactivación de CMV pero se desconoce hasta la fecha una técnica ex vivo que detecte estas células. Nuestros resultados demuestran que los tetrámeros que hemos diseñado para detectar células CD4+ anti-CMV proporcionan un marcaje fiable de estas células y los hemos utilizado para caracterizar fenotípicamente esta población de células CD4+ anti-CMV en sujetos sanos ex vivo demostrando que las células CD4+ específicas de CMV presentan un fenotipo efector memoria, en un alto grado de diferenciación y además poseen potencial citotóxico. Una vez descrito el fenotipo de estas células en individuos sanos se puede incorporar en la monitorización de los pacientes tras el alo-TPH.Programa Oficial de Doctorado en Ciencias de la Salud (RD 1393/2007)Osasun Zientzietako Doktoretza Programa Ofiziala (ED 1393/2007