Caractérisation du domaine de multimérisation de la protéine REV du virus de l'immunodéficience bovine

Précédemment, il a été montré chez le virus de l'immunodéficience humaine (VIH-1) que la formation de multimères est essentielle pour que la protéine Rev puisse lier une structure secondaire des ARN viraux, l'élément de réponse à Rev ou RRE, et assurer leur transport du noyau vers le cytoplasme. Cette étape est très importante pour une réplication efficace du virus. Le virus de l'immunodéficience bovine (VIB) possède aussi une protéine Rev. Cette dernière n'a toutefois pas été caractérisée entièrement. Le présent projet voulait montrer que cette protéine peut former des multimères in vitro et in vivo comme cela a été démontré pour le VIH-1. Un deuxième objectif était de localiser la région impliquée dans la formation de multimères in vitro. Pour ce faire, des mutants de Rev ont été clonés dans le vecteur pET-21b(+) afin de produire les différentes protéines dans un système bactérien. Après purification, un essai au glutaraldéhyde a été effectué pour observer la formation de multimères. Les résultats préliminaires ont montré que le domaine de multimérisation serait de type bipartite et se localiserait entre les acides aminés 1 à 30 et 91 à 110. Les mutants Rev ont aussi été clonés dans des vecteurs de fluorescence par complémentation (BiFC), puis transfectés dans des cellules épithéliales rénales HEK 293T pour effectuer un test de fluorescence par complémentation. La localisation de la protéine Rev n'était pas affectée par la protéine de fluorescence et un signal vert a été détecté pour tous les mutants. Le test a donc été validé. Les résultats du test BiFC montrent une diminution significative de la dimérisation pour les mutants M1 (∆1-30) et M5 (∆91-110). Ces travaux pourront éventuellement servir de base pour identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.\ud ______________________________________________________________________________ \ud MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : VIB, Multimérisation, BiFC, Virus, Protéine Re