Vecteur oncolytique viral permettant d'exprimer le gène codant pour la protéine M du virus de la stomatite vésiculaire sous le contrôle d'un système d'expression inductible

Le succès dans le domaine de la thérapie génique repose sur la disponibilité de véhicules de transfert ayant une meilleure efficacité que les outils présentement utilisés. Jusqu'à présent, des méthodes non virales et virales de transfert de gène ont été utilisées. Les perspectives de thérapies géniques utilisant les vecteurs viraux peuvent s'appliquer à de nombreuses maladies, dont le cancer. Les vecteurs rétroviraux de type Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV) ont la capacité d'infecter les cellules en division, telles les cellules transformées. Il est connu que la protéine M du Virus de la Stomatite Vésiculaire (VSV) contribue à la pathogénèse du virus par son habileté à provoquer l'apoptose. La protéine M contribue directement à l'inhibition de la transcription des gènes cellulaires, du transport nucléocytoplasmique et provoque l'arrondissement cellulaire. Il existe plusieurs variants de VSV portant une mutation ou non au niveau de la protéine M. Le variant T1026 possède une mutation au niveau de l'acide aminé 51 (M51R) de la protéine M, alors que le variant TP6 n'en possède pas. Les deux protéines utilisées dans ce travail, TP6 (sauvage) et T1026 (mutante), génèrent des effets cytopathiques différents chez les cellules lors d'une infection par le virus. Les gènes M des variants TP6 et T1026 du VSV ont été respectivement insérés dans le vecteur rétroviral pL6N2-RHS3H/ZF2-PL sous le contrôle d'un système d'expression inductible. L'hypothèse de travail est que l'expression du gène M de VSV, sous contrôle inductible et à partir d'un vecteur rétroviral, devrait permettre de provoquer les mêmes effets cytopathiques menant à l'apoptose. Le vecteur pL6N2-RHS3H/ZF2-PL a été utilisé afin d'exprimer le transgène M, dans le but d'induire l'apoptose chez les types cellulaires HeLa, et L-929, mais aussi afin de comparer les effets cytopathiques engendrés par l'expression de la protéine M chez une lignée cellulaire saine et transformée, NIH 3T3 et NIH 3T3 Ras. D'abord, les vecteurs ont été transfectés sur les lignées cellulaires HeLa et L-929 et des tests d'apoptose ont été réalisés. Par la suite, des lignées cellulaires stables ont été créées afin de procéder à des tests de viabilité cellulaire à plus grande échelle. Les résultats obtenus montrent que l'expression de la protéine M du VSV, sous contrôle inductible, permet de provoquer la mort des cellules, tant pour la protéine MTP6 sauvage que pour la protéine MT1026 mutante. Les cellules transformées NIH 3T3 Ras semblent cependant moins sensibles à l'expression de la protéine M que les cellules saines NIH 3T3. L'expression de la protéine M n'a pas été aussi contrôlée que prévue, en raison de l'inefficacité du système d'expression inductible et plusieurs clones ont été perdus en raison de l'expression basale de la protéine M.\ud ______________________________________________________________________________ \ud MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Thérapie génique, Virus de la stomatite vésiculaire, Apoptose, Oncolyse, Vecteur rétrovira