Caracterización molecular de razas severas y débiles del virus de la tristeza de los cítricos

La tristeza de los cítricos es la enfermedad viral más importante de éstos a nivel mundial; debido a que\ud en los últimos 20 años ha causado la muerte a más de 100 millones de árboles en América del Sur, California, Florida (EE.UU.), Israel y España. El Citrus tristeza closterovirus (Virus de la tristeza de los cítricos o VTC) se transmite principalmente por el áfido Toxoptera citricida y por material vegetativo infectado (injertos). El áfido T. citricida ha sido recientemente detectado en el sureste de nuestro país. La presencia del virus y del áfido en el territorio mexicano es relevante porque la mayoría de las plantas comerciales (más del 90%) están injertadas sobre naranjo agrio que es susceptible al VTC, por lo que se podría ocasionar una epidemia. La caracterización molecular de diferentes razas, la cual incluye la secuenciación completa del genoma del VTC, ha abierto la puerta para hacer diversos estudios encaminados a contrarrestar (disminuir) los daños causados por este complejo viral. Por lo anterior, este trabajo de investigación tuvo como objetivo desarrollar un método para diferenciar razas del VTC, basado en la caracterización molecular del genoma viral. Para lograrlo se amplificó la secuencia del gen de la cápside, posteriormente se buscaron polimorfismos con enzimas de restricción que permitieran diferenciar razas débiles de severas. Los resultados mostraron que al realizar los RFLPs empleando la enzima Hae III se lograron diferenciar las razas débiles de las severas. De igual forma, el uso de la enzima Kpn I discriminó las razas que ocasionan picado de tallo de las que inducen el declinamiento. Los dendrogramas derivados del alineamiento múltiple de las secuencias de aminoácidos mostraron la separación de las razas débiles de las severas. El análisis de la secuencia nucleotídica del gen p25 en las posiciones 49, 63 y 124 mostró a los aminoácidos glicina, treonina y fenilalanina presentes en las razas severas. The Citrus Tristeza closterovirus (CTV) is the most important viral disease of the citrus trees in the world, infecting more than 100 million trees in the past 20 years in South America, U.S.A, Israel and Spain. The CTV is transmitted by the aphid Toxoptera citricida and by infected vegetative material. The most visible effects caused by the CTV are a fast decline and death of trees grafted onto rootstocks (Citrus aurantium L). The presence of the virus and the aphid in the Mexican territory constitutes a real hazard considering that most of the commercial plants (> 90%) are grafted on C. aurantium, which is susceptible to CTV, thus creating the possibility of an epidemic. The detection of VTC has been mainly achieved by serology, and lately by molecular methods. The molecular characterization of different races, including the complete genome sequence of the CTV, has allowed progress in obtaining transgenic citric cultivars resistant to this virus. This study was aimed at developing a method for the differentiation of races of the CTV, based on the molecular characterization of the viral genome. In doing so, we amplified the coat protein gene. Afterward, we examined its polymorphisms with restriction enzymes that allowed differentiation between weak and severe races. Our results show that using the enzyme Hae III in PCR products of the gene p25, it was possible to relate its genetic profiles to the different CTV races. The use of Hae III allowed us to distinguish the weak races (CBG-T2, CBG-V2) from the severe ones (CBG-NL1, CBG-NL2, CBGV1, H33). Furthermore, the enzyme Kpn I allowed differentiating between races that cause stem pitting and those inducing decline. The analysis of the P25 gene sequence in positions 49, 63, and 124 demonstrated the presence of the amino acids glycine, threonine, and phenylalanine in severe races. These amino acids could be involved in the pathogenicity of the CTV