Estudo de expressão génica em Vitis vinifera em presença do fitoplasma Flavescência dourada

Mestrado em Viticultura e Enologia - Instituto Superior de Agronomia - UL / Faculdade de Ciências - Universidade do PortoEntre os agentes fitopatogénicos que podem afetar as plantas, os fitoplasmas são uma séria ameaça. Os fitoplasmas são bactérias desprovidos de parede celular, pertencentes à classe Mollicutes e são parasitas obrigatórios de plantas e insetos vetores. A Flavescência Dourada (FD) é uma doença devastadora, difundida por vários países da União Europeia e, provavelmente, a mais séria ameaça em videira provocada por fitoplasmas; é transmitida de forma epidémica na vinha pelo inseto vetor cicadelídeo Scaphoideus titanus Ball (Schvester, 1961) durante o seu processo de alimentação. As interações moleculares entre a videira e o fitoplasma FD são ainda insuficientemente conhecidas devido, em grande parte, à dificuldade de se multiplicar os fitoplasmas “in vitro”. Neste estudo preliminar propôs-se analisar os perfis de expressão dos genes EDS1, EDL1, EDL2, EDL5, NPR1 e SAG12, relacionados com mecanismos de defesa das plantas, numa casta branca, “Arinto”, e numa casta tinta, “Padeiro de Basto”, castas típicas da região dos vinhos verdes. Primeiramente, realizou-se o diagnóstico de várias patologias que pudessem influenciar os resultados de expressão génica para além da FD. Neste contexto, efetuou-se o rastreio de sete vírus, através de testes ELISA, cujos resultados foram negativos. Foi também efetuada a deteção dos fitoplasmas BN e FD, por rt-PCR triplex, com resultados positivos para a FD em várias sub-amostras. Posteriormente, foi efetuada a extração de RNA e a síntese de cDNA seguida de rtPCR. Foi selecionado o gene GPDH como normalizador no método 2-∆∆Ct, para cálculo da expressão dos referidos genes ligados ao processo infecioso. Observou-se a sobreexpressão dos genes EDL1 e EDL5 na casta branca e o último também na tinta assim como a sub-expressão dos genes EDS1 e EDL2 na casta branca, concluindo-se que, em plantas com FD, estes genes aparecem com perfis alteradosN/