Fisiología celular y calidad seminal durante la conservación del semen porcino refrigerado

La Inseminación Artificial con semen diluido refrigerado es una de las tecnologías de la reproducción más utilizadas en el ganado porcino. Para un máximo aprovechamiento del eyaculado y para que los espermatozoides conserven su capacidad fecundante durante varios días los eyaculados son diluidos con diluyentes comerciales, obteniéndose dosis seminales para inseminación. En la presente Tesis Doctoral hemos evaluado la capacidad de conservación de dosis seminales de dos diluyentes, MRA y X-Cell, en dos razas, Duroc e Ibérica, concluyendo que la raza es un factor de variación más en la capacidad del diluyente para la conservación de la motilidad espermática a largo plazo. Pese a ser diluidas en un medio adecuado, las dosis seminales van perdiendo durante la conservación la capacidad fecundante, lo que podría ser debido a la susceptibilidad de los espermatozoides porcinos a la oxidación. Por este motivo estudiamos el efecto de dos antioxidantes, melatonina y resveratrol, en la conservación. Nuestros resultados desaconsejan el uso de estos dos antioxidantes para mejorar la conservación de dosis seminales porcinas durante 7 días a 17ºC. Adicionalmente, estudiamos la implicación de una quinasa reguladora del metabolismo, AMPK, en la conservación. Hemos descrito por primera vez que la actividad de AMPK (fosforilación en Thr172 de la AMPK) se incrementa en función del tiempo de conservación de los espermatozoides porcinos a 17ºC. Finalmente, nuestros resultados indican que la actividad de la AMPK es esencial en el mantenimiento de la calidad de las dosis seminales conservadas varios días a 17ºC.Currently, one of the most used techniques in the field of porcine reproduction is the artificial insemination with refrigerated semen. In order to optimize the maximum use of an ejaculate and to preserve spermatozoa fertilizing capacity, ejaculates are diluted in commercial extenders to produce seminal doses. In this Doctoral Thesis we have evaluated the ability of two extenders, MRA and X-Cell, to preserve seminal doses from two breeds, Duroc and Iberic. Our conclusion is that the ability of a diluent to preserve spermatozoa motility for long time is influenced by the breed. It is known that seminal doses time-dependently lose their fertilizing capacity, likely due to the susceptibility of boar spermatozoa to oxidation. For this reason, we have studied the effect of two antioxidants, melatonin and resveratrol, during seminal dosis conservation. Our results do not support/advice the use of any of these two antioxidants to improve the preservation of boar seminal doses during 7 days at a 17ºC. Additionally, we have studied the implication of a kinase that regulates metabolism, AMPK, during semen conservation. We have described for the first time that AMPK activity (evaluated as phosphorylation at residue Thr172) (PThr172-AMPK) increases over the time of boar spermatozoa preservation at 17ºC. Finally, our results indicate that a proper function of AMPK activity is necessary/required for the maintenance of the quality of seminal doses preserved for long term at 17ºC.- Ministerio de Ciencia e Innovación (AGL 2010-15188): “Función de la proteína quinasa activada por AMP, AMPK, en la célula germinal masculina: posible aplicación biotecnológica a la conservación se semen porcino”. - Gobierno de Extremadura (PRI 09A077) “Función de la proteína quinasa AMPK en la célula germinal masculina: aplicación a la optimización del protocolo de criopreservación de semen de cerdo ibérico”. - Gobierno de Extremadura –PDT 08A057. - Universidad de Extremadura- Ayudas a Grupos (GRU-09019/GRU-06116). - Gobierno de Extremadura. Beca-contrato de Formación de Personal Investigador (FPI) (PRE 09015)