In vitro penetration test using oocytes and in vivo fertility after heterospermic insemination in swine

The knowledge of the reproductive potential of a male is of economic and reproductive importance, mainly if used in programs of artificial insemination. The conventional tests for semen quality evaluation do not have the capacity to measure the fertilizing potential of a sample, although they indicate if that one is fertile or not. The in vitro penetration test, appears in this context as an alternative laboratorial test to categorize of males capacity of fecundation, as mimics in vitro what happens in vivo. However this test has its use limited for for difficult execution and high cost. With the objective to simplify the test, the present work evaluated alternatives for reduction of the execution time, use of cryopreserved oocytes in different methods and its association with in vivo fertility through heterospermic insemination and following diagnostic fertility. It was concluded that: 1) It is possible to use the incubation system BOTTLE, to replace the conventional incubation system, eliminating the need for using expansive CO2 incubator; 2) Oocytes can be cryopreserved in CRIOVIAL, together with the medium of fecundation and mineral oil, eliminating the use of stereoscopic lupa to manipulate oocytes in the day of the execution of the test; 3) It is viable to reduce co-incubation time of oocytes and sperm for 6 hours, if sperm concentration is of 2 X 106 per ml of way of used fecundation; 4) The paternity diagnosis disclosed that when inseminating females swine with one pool of semen of four males, using a dose of 2,8 X 109 spermatozoa, all the males had the same participation in the paternity of the produced pigsO conhecimento do potencial reprodutivo de um macho é de importância econômica e reprodutiva, principalmente se ele é utilizado em programa de inseminação artificial. Os testes convencionais que avaliam a qualidade seminal não possuem a capacidade de medir o potencial fertilizante de uma amostra e, apenas indicam se a mesma é fértil ou não. O teste de penetração espermática in vitro, aparece neste contexto como um teste laboratorial alternativo para categorizar os machos férteis, quanto a sua capacidade de fecundação, pois mimetizam in vitro o que acontece in vivo. No entanto, este teste tem seu uso limitado por ser de difícil execução e por utilizar equipamentos de alto custo. Com o objetivo de simplificar o teste, o presente trabalho avaliou alternativas para diminuição do tempo de execução, utilização de oócitos criopreservados de diferentes maneiras e sua associação com fertilidade in vivo através de inseminação heterospérmica e diagnóstico de paternidade dos leitões nascidos. Foi concluído que: 1) É possível utilizar o sistema de incubação FRASCO, em substituição ao sistema de incubação convencional, eliminando a necessidade de uso da onerosa incubadora de CO2; 2) Pode-se congelar oócitos em CRIOTUBO, juntamente com o meio de fecundação e óleo mineral, eliminado a utilização de lupa esteriomicrocópica para manipular oócitos no dia da execução do teste; 3) É viável reduzir o tempo de co-incubação de oócitos e espermatozóides para 6 horas, desde que a concentração espermática utilizada seja de 2 X 106 espermatozóide para cada ml de meio de fecundação utilizado; 4) O diagnóstico de paternidade revelou que ao inseminar fêmeas suínas com um pool de sêmen de quatro machos, utilizando dose inseminante de 2,8 X 109 espermatozóides, todos os machos tiveram participação semelhante na taxa de paternidade dos leitões nascido