Development of immunotherapy using peptide vaccine in canine spontaneous tumors

2010-2011年度科学研究費助成事業(科学研究費補助金(若手研究(B)))研究成果報告書 課題番号：22780282 研究代表者：木之下明日香 (鹿児島大学農学部准教授)犬の自然発生腫瘍に対する免疫療法の開発としてWT1蛋白を標的としたペプチドワクチンによる免疫療法の可能性を探索した。ペプチドワクチン作成にあたり、犬WT1遺伝子を単離し、その塩基配列を決定した。２つのcDNAクローンが得られたが、いずれも人で報告のあるアイソフォームと同等の構造を有し、うち１つは腫瘍において高発現しているアイソフォームであったことから、このクローンの予測されるアミノ酸配列に基づきペプチドを作成した。一方、犬の正常組織および自然発生腫瘍組織におけるWT1蛋白の発現について免疫組織化学を用いて検討したところ、正常組織では腎臓、脾臓、肺、卵巣といった限られた組織においてわずかに発現が認められるのみであったのに対し、腫瘍組織においては様々な組織で強い発現が認められた。The possibility of peptide vaccine targeting WT1 protein has been investigated. as a novel treatment strategy for spontaneous tumors in dogs. To establish an effective peptide vaccine, we cloned and sequenced the canine WT1 cDNA. Two canine WT1 cDNA clones were isolated and seemed to correspond to isoforms reported in human WT1 gene. Based on its deduced amino acid sequences, five peptides were made and used. Moreover, expression of WT1 protein in normal and tumor tissues in dogs were investigated using immunohistochemistry. In normal tissues, only weak expression of WT1 protein were detected in kidney, spleen, lung and ovary and no positive signal were detected in other normal tissues. On the other hand, strong signals were detected ubiquitously in cytoplasm and/or nucleus of tumor cells