Estrategias de genética reversa aplicadas al vesivirus de conejo

Ingeniería genéticaEn el ámbito de la Virología, se denomina genética reversa al proceso de rescate de virus RNA de novo a partir de una copia del genoma viral en forma de cDNA. El trabajo recogido en esta memoria de tesis doctoral se ha dirigido a la obtención de un sistema de genética reversa para el vesivirus de conejo (RaV), uno de los pocos calicivirus capaz de ser propagado en cultivos celulares. Para ello, se han utilizado diferentes estrategias para expresar distintos clones de cDNA sintetizados. En primer lugar se realizaron estudios sobre la transfección y la traducción de RNAs sintéticos en cultivos celulares susceptibles al RaV, prestando especial atención al papel de la región no traducida del extremo 5' del genoma viral en la producción de proteínas. Seguidamente, se abordó el análisis de la capacidad infectiva de los transcritos sintéticos derivados de los clones de cDNA de RaV. Aunque uno de los transcritos resultó infectivo, las dificultades encontradas en la caracterización del clon responsable sugirió la conveniencia de emplear una estrategia alternativa en la que el RNA es producido en el citoplasma de las células infectadas empleando un poxvirus auxiliar (rFPV/T7). Con esta aproximación, se han conseguido rescatar virus infecciosos derivados del clon A23 de RaV, en el que es posible introducir una etiqueta molecular que diferencia el virus recombinante del silvestre original. Los virus recombinantes exhiben unas características similares al virus silvestre, aunque muestran una menor capacidad proliferativa. La presencia de 61 residuos de nucleótidos adicionales en el extremo 5' del transcrito derivado del clon A23 no impide la producción de virus siendo estos residuos eliminados durante el proceso de rescate o replicación posterior. El clon infeccioso de RaV constituye una herramienta de gran utilidad que puede facilitar en gran medida el estudio de la biología de éste y otros calicivirus. Asimismo, permite explorar el potencial biotecnológico de este virus como vector vacunal o como sistema de expresión de genes heterólogos