Susceptibilidad al cáncer colorrectal familiar no polipósico con tumores estables a microsatélites (HNPCC-X)

Tutor de la tesis, Agustín Antonio Roca Martínez, Dpto. Biología Funcional, Universidad de Oviedo.El cáncer colorrectal familiar no polipósico (HNPCC) representa un 5% del los casos totales de cáncer colorrectal (CCR). Aproximadamente la mitad de estas familias presentan alteraciones germinales en genes pertenecientes a la vía de reparación de DNA ¿MisMatch Repair¿ (MMR), lo que origina una deficiencia en la reparación de errores de replicación en zonas de repetición de nucleótidos (inestabilidad a microsatélites, MSI) conllevando a una mayor tasa de mutaciones y una predisposición genética al cáncer CCR. En la otra mitad de familias HNPCC aún no se han identificado las causas de predisposición al cáncer lo que dificulta su asesoramiento en la Consultas de Consejo Genético. Es por tanto un objetivo de esta tesis el estudio de la susceptibilidad al CCR en este grupo de familias. Para llevar a cabo este objetivo, se seleccionaron familias que cumplen criterios estrictos de patrón de herencia dominante al CCR y que no presenten alteraciones genéticas o histoquímicas en la vía MMR ni tumores MSI (familias HNPCC-X). En estas familias se realizaron tres tipos de estudios: 1. Estudio de la vía de reparación de la 8OHdG como posible fuente de inestabilidad genética. La 8OHdG es una base modificada por el estrés oxidativo, su poder mutagénico radica en su afinidad por aparearse con la adenina y provocar cambios G>T. Para ver si el estrés oxidativo juega un papel importante en la carcinogénesis de las familias HNPCC-X, se estudió el estado de los genes reparadores OGG1, MUTYH y MTH en línea germinal, la tasa de transversiones somáticas G>T en el gen KRAS y los niveles de 8OHdG en núcleos de células tumorales. a. Como resultado del estudio genético de los genes reparadores se encontraron dos variantes raras (OGG1-R46Q y MUTYH-G396D) que actúan como factores de riesgo moderado y una variante polimórfica (MTH1-D142D) que actúa como alelo de baja penetrancia en familias HNPCC-X. b. Tras el análisis de mutaciones somáticas en el gen KRAS se detectó un incremento de cambios G>T en familias HNPCC-X en comparación con familias HNPCC-MSI, sugiriendo un mayor papel del daño oxidativo en la carcinogénesis de estas familias. c. El análisis por inmunofluorescencia de los niveles de 8OHdG en tumores HNPCC-X no mostró resultados concluyentes pero sugirió un posible incremento del daño oxidativo en tejido adyacente al tumor en tumores HNPCC-X con respecto a tumores HNPCC-MSI. 2. Estudio del estado de la vía Wnt en tumores de familias HNPCC-X. Debido al importante papel de esta vía como iniciadora de la carcinogénesis colorrectal, se quiso analizar la expresión de distintas proteínas implicadas en la vía Wnt (ß-catenina, c-myc, ciclina D1 y foxO3a) en tumores HNPCC-X y HNPCC-MSI. Tras el análisis inmunohistoquímico se observó una mayor activación de la vía Wnt en tumores HNPCC-X asemejándose más a la carcinogénesis de tumores colorrectales esporádicos. 3. Estudio del diplotipo Yin-Yang del gen APC y posible implicación en la susceptibilidad al CCR en familias HNPCC-X. Se planteó la posibilidad de que procesos de recombinación homóloga actuasen como mecanismos de inestabilidad genética pudiendo afectar a oncogenes o genes supresores de tumor. De esta manera, el grado de similitud entre alelos podría actuar como factor de riesgo a desarrollar cáncer. Para testar esta hipótesis se llevaron a cabo estudios de asociación para el diplotipo homocigoto Yin-Yang del gen supresor de tumor APC en distintas poblaciones de CCR. Encontramos un aumento significativo de diplotipos homocigotos en la población de CCR esporádico pero no en familias HNPCC-X, lo que descarta que los procesos de recombinación homóloga sean procesos clave en la carcinogénesis de familias HNPCC-X. En resumen, las familias HNPCC-X engloban a un grupo heterogéneo de familias que presentan procesos carcinogénicos distintos a los descritos en CCR esporádico o HNPCC-MSI. Los resultados expuestos en este trabajo explican la susceptibilidad al cáncer por alteraciones en la reparación de la 8OHdG en una minoría de estas familias. Es necesario seguir profundizando en los mecanismos carcinogénicos implicados en este tipo de familias