IDENTIFICACI 3N BACTERIANA EMPLEANDO PCR-DGGE EN LECHE DE VACAS CON MASTITIS DE UN REBA 1O MESTIZO GYR-HOLSTEIN DEL MUNICIPIO OBISPO RAMOS DE LORA, M\uc9RIDA, VENEZUELA.

Con el objetivo de caracterizar las bacterias presentes en muestras de leche mast\uedticas de vacas Girolando (Mestizas Holstein-Gyr), procedentes de un reba\uf1o con una historia de mastitis cl\uednica de 6 meses y baja en la producci\uf3n lechera, se emple\uf3 la t\ue9cnica PCR-DGGE usando como marcador la regi\uf3n V3 del ADNr 16S, la cual es una metodolog\ueda independiente de cultivo bacteriol\uf3gico. La valoraci\uf3n de mastitis sub cl\uednica se realizo por medio de CMT y las muestras se tomaron de vacas que ten\uedan al menos 4 semanas sin terapia antibi\uf3tica. Las al\uedcuotas fueron usadas para bacteriolog\ueda e identificaci\uf3n molecular. Solo se seleccionaron las muestras negativas a cultivo para hacer la PCR-DGGE. El valor de mastitis sub-cl\uednica por CMT al momento de la toma de muestra fue de 48.07% (225 cuartos). El PCR-DGGE permiti\uf3 evidenciar la presencia de varios tipos de bacterias en las muestras estudiadas, las cuales se relacionaron m\ue1s estrechamente a bacterias de los filos Firmicutes y Proteobacterias, donde destac\uf3 la presencia del g\ue9nero Acinetobacter. Muchos de estos microorganismos est\ue1n implicados en multi-resistencia antibi\uf3tica, por lo cual la t\ue9cnica se convierte en una herramienta \ufatil para analizar estas poblaciones microbianas en vacas con mastitis cl\uednica y cultivo negativo y establecer mejores medidas de control y prevenci\uf3n contra esta patolog\ueda en las fincas lecheras. Se requieren otros estudios para establecer las posibles implicaciones de los microorganismos aislados sobre la salud humana y animal. Palabras Claves del Autor: Bacterias, Mastitis, Cultivo negativo, PCR-DGGE ABSTRACT In order to characterize the composition of bacteria in samples of milk from crossbreed Gyr-Holstein cows affected with mastitis, from a herd with a history of clinical mastitis from six months ago and low milk production, a culture-independent PCR - DGGE technique using as a marker the V3 region 16S rDNA was carried out. The assessment of sub clinical mastitis was performed by CMT. Samples were taken from cows that had a least 4 weeks without antibiotic therapy, and aliquots were used for bacteriology and molecular identification. Only culture negative samples were selected for PCR - DGGE. The level of sub clinical mastitis by CMT at the moment of sampling was 48.07 % (225 quarter). PCR-DGGE, revealed the presence of several types of bacteria in the samples studied, which were more closely related to bacteria of the Firmicutes and Proteobacteria phylum, which highlight the presence of the genus Acinetobacter. Most of these microorganisms are involved in antibiotic multi-resistance, so the technique becomes a useful tool for analyzing these microbial populations in cows with clinical mastitis and negative culture and establish better recommendations for control and prevention of this pathology in dairy farms. Others researches are needed to determine the implications of microorganisms isolated in this work over animal and human health. KEY WORDS: Bacteria, Mastitis, Negative culture, PCR-DGGE