Análise fenotípica e genética de fatores virulência de isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa multidroga-sensível e multidroga-resistente de Recife - PE

Pseudomonas aeruginosa é um patógeno humano oportunista responsável por causar uma enorme variedade de infecções agudas e crônicas com níveis significativos de morbidade e mortalidade. A sua plasticidade genética e metabólica possibilitou o desenvolvimento de isolados multidroga-resistentes (MDR) e a capacidade de expressar de inúmeros fatores de virulência. Este trabalho teve como objetivo correlacionar o padrão de susceptibilidade antimicrobiana, a produção de fatores de virulência através de técnicas fenotípicas (protease alcalina, hemolisina, fosfolipase C, lipase e pigmentos) e genéticas (genes aprA, lasA, lasB, plcH e toxA) e a variabilidade genética de 30 isolados clínicos de P. aeruginosa isoladas de diferentes sítios de infecção, sendo 15 isolados multidroga-sensível (MDS) e 15 MDR. Nossos resultados revelaram que 50% dos isolados foram resistentes a ceftazidima, sendo as cefalosporinas a classe antimicrobiana com mais isolados resistentes, principalmente entre isolados MDR onde todos foram resistentes. Entre os isolados MDS, todos foram sensíveis a carbapenêmicos e quinolonas. A grande diversidade apresentada no perfil de susceptibilidade às classes de antimicrobianos sugere a existência de associação de diversos mecanismos de resistência. Entre os isolados 53% foram amostras de secreção traqueal, entre estes todos os isolados sensíveis a todos os antimicrobianos testados. Em relação aos fatores de virulência os isolados MDR apresentaram menor produção de piocianina e lipase, e menor detecção dos genes toxA e lasA, enquanto os MDS, apresentaram menor produção de hemolisina e fosfolipase C. Não houve diferença entre os grupos para produção de protease alcalina e o gene aprA. Todos isolados apresentaram produção de piocianina e os genes lasB e plcH. Em relação ao perfil genético, foi encontrada uma grande diversidade, em um total de 30 isolados foi possível observar 28 perfis genéticos. A presença dos clones ocorreu entre os isolados MDR. Embora alguns estudos relatem que o acréscimo de mecanismos de resistência leva a diminuição dos fatores de virulência, sugerindo assim que, as cepas de P. aeruginosa MDR têm a virulência diminuída quando comparada com cepas MDS, neste trabalho dos resultados obtidos não constatamos esta tendência para produção de protease alcalina, hemolisina, fosfolipase C e para a detecção do gene aprA, sugerindo que esta correlação seja multifatorial. Contudo, a ocorrência destes fatores de virulência em quase todos os isolados estudados sugere um elevado nível de patogenicidade dos mesmos. Concluímos portanto, que P. aeruginosa é um patógeno capaz de acumular inúmeros fatores de virulência e frequentemente associado à multirresistência, o que dificulta o tratamento de infecções causadas por esta bactéria.CNPqPseudomonas aeruginosa is an opportunistic human pathogen responsible for causing a wide variety of acute and chronic infections with significant levels of morbidity and mortality. Its genetic and metabolic plasticity enabled the development of multidrug-resistant (MDR) strains and the ability to express countless virulence factors. This paper aimed to correlate the pattern of antimicrobial susceptibility, the production of virulence factors through phenotyping techniques (alkaline protease, hemolysin, phospholipase C, lipase and pigments) and genetic (gene aprA, lasB, lasB, plcH e toxA) and the genetic variability of 30 clinical isolates of P. aeruginosa isolated from different sites of infection, 15 isolates multidrug-sensitive (MDS) and 15 MDR. Our results showed reveal that 50% of the isolates were resistant to ceftazidime, cephalosporin was the antimicrobial class with more resistant isolates, especially isolates MDR that were totally resistant to them. Among the isolated MDS, all were sensitive to carbapenems and quinolones. The large diversity presented in the susceptibility profile to antimicrobial classes suggests the existence of an association of several resistance mechanisms. Among the isolated 53% came from tracheal secretions, among them all isolates susceptible to all antimicrobials tested. Regarding virulence factors MDR isolates presented lower production pyocyanin and lipase, and lower detection toxA e lasA genes, since the MDS, showed lower production of hemolysin and phospholipase C. There was no difference between groups for the production of alkaline protease and aprA gene. All isolates presented pyocyanin production and lasB and plcH genes. In relation to genetic profile, it was verified a large diversity, in a totality of 30 isolates was observed 28 genetic profiles. The presence of clones occurred among the MDR isolates. Even though some studies to report that the increase of resistance mechanisms leads to the reduction of virulence factors, suggesting that the strains of P. aeruginosa MDR have decreased virulence strains compared with MDS, this work the results obtained we have not found this tendency to alkaline protease production, hemolysin, phospholipase C and for detecting aprA gene, suggesting that this correlation is multifactorial. However, the occurrence of these virulence factor in almost all isolates studied suggests a high level of pathogenicity the same. Therefore, it can be concluded that, P. aeruginosa is a pathogen with ability to accumulate several virulence factors and often associated to multiresistant complicating the treatment of infections caused by this bacterium