Produção in vitro de embriões bovinos: uso da glutationa durante o processo de lavagem e capacitação espermática

The aim of this work was evaluated the effect of Glutathione addition (GSH – 0.3mg/mL) in the semen separation, washing and capacitation steps on the bovine in vitro embryo production. Semen from one only bull was separated with Percoll and centrifugated twice with in vitro fertilization (IVF) medium (washing). Spermatozoa were capacitated in IVF medium during 1 h in 5% CO2 incubator at 38,5ºC. Experimental groups were: Control – it was not supplemented with GSH in separation and washing and capacitation was excluded; Group 1: without GSH in all steps; Group 2: GSH supplementation just in the capacitation; Group 3: GSH supplementation in the separation and washing steps (first washing only); Group 4: GSH supplementation in all steps. Bovine oocytes collected at slaughterhouse were in vitro matured and fertilized after semen preparations. Embryos were cultured during seven days with cleavage being analysed at day 2 and blastocyst rates and total embryo cell number (quality) at day7. Embryo rates were evaluated with chi-square test (χ2) and embryo quality with ANOVA in the software Bio Estat 3.0 (AYRES, et al., 2003) at significance level of 5%. There was not effect of the GSH supplementation in different steps of semen preparation (p>0,05) on cleavage, blastocysts and hatching rates (Control Group: 52%, 35% and 50%, respectively; G1: 60%, 37% and 44%, respectively; G2: 57%, 40% and 50%, respectively; G3: 56%, 37% and 51%, respectively; G4: 47%, 30% and 48%, respectively). Moreover, it was not observed effect on mean (±SD) of embryo total cell number (Control: 30,9±21,87, Group 1:57,8 ±18,26; Group 2:66,2 ±20,14; Group 3:62,1 ±22,48; Group 4:76,7 ±29,28; p> 0,05).O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da glutationa (GSH – 0,3mg/mL), no processo de separação, lavagem e capacitação espermática sobre a taxa de produção in vitro de embriões bovinos. O sêmen de um touro foi separado através de gradientes de Percoll e centrifugados duas vezes em meio de fecundação in vitro (lavagem). Espermatozóides foram capacitados in meio de FIV durante 1 h em estufa úmida a 38,5°C e 5% de CO2. Os grupos experimentais foram: Controle (não possui a etapa de lavagem; Grupo 1: sem GSH nas três etapas; Grupo2: GSH somente na capacitação; Grupo3: GSH somente na separação e na lavagem (primeira lavagem); Grupo 4: GSH em todas as etapas. Oócitos provenientes de abatedouro foram maturados in vitro e fertilizados após as preparações feitas no sêmen. Os embriões foram cultivados durante 7 dias com análise da clivagem no 2º dia, taxa de blastocisto e número total de células embrionárias no 7º dia. As taxas de desenvolvimento embrionário foram analisadas pelo qui-quadrado (χ2) e a qualidade embrionária pela ANOVA através do programa Bio Estat 3.0 (AYRES, et al., 2003) com nível de significância de 5%. Não houve diferença estatística efeito do uso da GSH nas diferentes etapas do processo de preparação espermática sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão (Grupo Controle: 52, 35 e 50%; Grupo 1: 60, 37 e 44%; Grupo 2: 57, 40 e 50; Grupo 3: 56, 37 e 51%; Grupo 4: 47, 30 e 48%, respectivamente, p>0,05). Também não foi observado diferença estatística quanto ao número de células embrionárias (Grupo Controle: 30,9±21,87, Grupo 1: 57,8±18,26; Grupo 2: 66,2±20,14; Grupo 3: 62,1±22,48; Grupo 4: 76,7±29,28; p>0,05)