Estudio molecular del condiloma acuminado: correlación clínica e histopatológica, genotipo del virus del papiloma humano y factores de riesgo asociados.

INTRODUCCIÓN: Los condilomas acuminados(CA) se encuentran entre las enfermedades más comunes de transmisión sexual. Aunque habitualmente se entiende que es el virus del papiloma humano (VPH) de bajo riesgo, genotipos 6 y 11 los que están asociados con el CA, sólo existen un número limitado de estudios publicados que informan de la prevalencia específica del genotipo del VPH. El objetivo de nuestro estudio fue evaluar la prevalencia de genotipos del VPH para un elevado número de casos que involucran tanto a hombres y mujeres y poder evaluar el beneficio potencial de una vacuna cuatrivalente (genotipos 6, 11, 16, y 18) contra el VPH en Valencia (España ) y analizar los factores de riesgo asociados a los diferentes genotipos de VPH. MÉTODOS: Un total de 93 mujeres y 77 hombres con un diagnóstico clínico de CA y que fueron atendidos en el Servicio de Dermatología del Hospital General de Valencia, fueron reclutados de forma prospectiva entre el período de marzo de 2007 hasta julio de 2008, antes de la introducción de la vacuna contra el VPH en Valencia (España). La determinación del genotipo del VPH se realizó con formalina fijando los tejidos y embebidos en parafina. El aislamiento del ADN se realizó mediante fenol-cloroformo y protocolos estándar de proteinasa-K. El ADN de VPH fue detectado por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) usando cebadores generales de consenso MY09 / MY11 y GP5 + / GP6 +. El ADN apropiado se valoró con cebadores b-globina como control interno para la amplificación de la muestra. El segundo ciclo de amplificación se realizó utilizando el LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania). Los productos de PCR se purificaron y se secuenciaron directamente con Cy5 marcado GP6 +, utilizando un Analizador Genético 3130 (Applied Biosystems). Las secuencias de nucleótido único obtenidas fueron alineadas con la base de datos GenBank (en NCBI), y las múltiples secuencias superpuestas se utilizaron con los datos de la base de Feoli-Fonseca et al. (1999). RESULTADOS: Se analizaron ciento sesenta y nueve biopsias que fueron beta-globina-positivas. La edad media de los pacientes fue de 27,5 años (rango, 17-71 años). La prevalencia global del ADN del VPH en pacientes con CA fue del 99,4% (14,2% de los pacientes estaban coinfectados con otro patógeno). Los genotipos del VPH más frecuentemente encontrados fueron los siguientes, por orden de frecuencia decreciente: 6 (55%) y 11 (29%), seguido de 16 (11,8%), 18 (4,1%), 81 (3% ). Los genotipos de bajo riesgo predominaron, con una prevalencia del 87,6%. Los genotipos de alto riesgo tenían una prevalencia del 18,9%. Se observó el ADN de HPV-6, HPV-11, HPV-16 y / o VPH-18 (solos o en asociación entre sí) en el 89% de todos los casos de CA. CONCLUSIONES: Este estudio nos permite proporcionar datos fiables sobre la distribución de genotipos del VPH en pacientes con CA. Nuestros resultados proporcionan una fuerte evidencia de que, en Valencia (España), los genotipos de VPH de mayor prevalencia en personas con CA son 6 y 11. Sin embargo, los genotipos del VPH de alto riesgo se detectaron en hasta un 18,9% de los casos. Presentar un primer episodio clínico de CA se asoció con genotipos del VPH de bajo riesgo oncogénico. Las lesiones recurrentes fueron más a menudo asociados con los genotipos de VPH de alto riesgo. Las mujeres presentaban más frecuentes lesiones recurrentes que los hombres. El nivel de estudios, el tratamiento previo de los CA, la edad, la localización y el tabaquismo fueron variables que se asociaron con los genotipos del VPH de alto riesgo. Debido a su eficacia del 99% para la prevención de los CA y con una cobertura de vacunación del 100%, la vacuna tetravalente contra el VPH podría prevenir el 89% de los casos de CA en Valencia (España).External acuminata condylomata (EAC) are among the most common sexually transmitted diseases. Although it is understood that low-risk human papillomavirus (HPV) genotypes 6 and 11 are associated with EAC, there have only been a few, small, published studies reporting the genotype-specific prevalence of HPV. The objective of our study was to assess the prevalence of HPV genotypes for a large number of cases involving both men and women and to evaluate the potential benefit of a quadrivalent (genotypes 6, 11, 16, and 18) HPV vaccine in Valencia (Spain) and analyze the risk factors associated to different HPV genotypes. METHODS: A total of 93 women and 77 men who presented with EAC to the Dermatology Deparment of General Hospital of Valencia, were prospectively recruited during the period March 2007 until July 2008, before the introduction of HPV vaccine in Valencia (Spain). HPV genotype determination with formalin fixed paraffin embedded tissues DNA isolation was performed by standard phenol-chloroform and proteinase-K protocols. The DNA of HPV was detected by nested polymerase chain reaction (PCR) using general consensus primers MY09/MY11 and GP5+/GP6+. Appropriate DNA was valued with b-globin primers as an internal control for sample amplification. The second amplification cycle was performed using the LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany). PCR products were purified and directly sequenced with Cy5 labeled GP6+, using an 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems). For typing, the single nucleotide sequences obtained were aligned with the GenBank database (at NCBI), and the multiple superimposed sequences were used with the data-base of Feoli-Fonseca et al. (1999). RESULTS: One hundred sixty-nine beta-globin-positive samples could be analyzed. The median age of patients was 27,5 years (range, 17-71 years). The overall prevalence of HPV DNA in patients with EAC was 99,4% (14,2% of patients were coinfected with another pathogen). The most frequently encountered HPV genotypes were as follows, by decreasing order of frequency: 6 (55%) and 11 (29%), followed by 16 (11,8%), 18 (4,1%), 81 (3%). Low-risk genotypes predominated, with a prevalence of 87,6%. High-risk genotypes had a prevalence of 18,9%. DNA from HPV-6, HPV-11, HPV-16 and/or HPV-18 (alone or in association with each other) was observed in 89% of all cases of EAC. CONCLUSIONS: This study survey to provide solid data on HPV genotype distribution among patients with EAC. Our results provide strong evidence that, in Valencia (Spain), the most prevalent HPV genotypes in persons with EAC are 6 and 11. However, in 18,9% of cases were detected high risk HPV genotypes. The first clinical episode of EAC was associated with low-risk HPV genotypes. Recurrent lesions were most often associated with high-risk HPV genotypes. Women were more frequently recurrent lesions than men. The level of education, pre-treatment of EAC, age, location and smoking were variables associated with high-risk HPV genotypes. Because of its 99% efficacy for the prevention of EAC and a vaccine coverage of 100%, the quadrivalent HPV vaccine could prevent 89% of EAC cases in Valencia (Spain)