Expresión diferencial de microRNAs en tumores de mujeres jóvenes con cáncer de mama: Cribado de dianas moleculares

El cáncer de mama constituye el cáncer invasivo más frecuente en mujeres, afectando a una de cada 8 mujeres a lo largo de su vida, siendo, además, la primera causa de muerte derivada de cáncer invasivo en la población española (15,5%). Las mujeres jóvenes representan únicamente el 3% del total de casos diagnosticados; sin embargo, estas pacientes presentan tumores de mayor tamaño e índice de proliferación, estando sobrerepresentados subtipos tumorales más agresivos y de peor pronóstico. Los microRNAs (miRNAs) son pequeñas moléculas de RNA no codificante, cuyo papel en la célula es regular la expresión de genes, bloqueando el paso de RNA mensajero a proteína. Su desregulación es típica en numerosas enfermedades, incluyendo cáncer, constituyen una herramienta muy útil como biomarcador diagnóstico y pronóstico debido a su estabilidad y reproducibilidad. El principal objetivo del trabajo de esta tesis ha sido establecer un perfil molecular característico del cáncer de mama en mujeres jóvenes. Para ello se seleccionaron 22 pacientes de cáncer de mama menores de 35 años y 12 pacientes mayores de 65 que no hubiesen recibido tratamiento neoadyuvante, no metastásicas y sin mutación en BRCA1/2, además de 3 mujeres sanas. Mediante un chip de hibridación de miRNAs se obtuvo la expresión en tejido tumoral de 1100 miRNAs humanos, de los cuales 91 mostraron una expresión diferente en mujeres menores de 35 años. Se obtuvo un perfil de miRNAs específico de mujeres jóvenes con cáncer de mama. Este perfil identificativo fue validado en líneas celulares procedentes de mujeres jóvenes (HBL100, HCC1500, HCC1937). Se estudió, además, en una serie de datos de 750 pacientes de cáncer de mama obtenidas a partir de datos depositados online de un estudio previo (METABRIC). Los miRNAs desregulados en mujeres jóvenes apuntaban a genes diana de rutas relacionadas con proliferación, supervivencia celular, migración y movilidad celular, y relacionadas directamente con procesos cancerosos. Se seleccionaron 18 miRNAs representativos, de los cuales, seis fueron validados mediante qRT-PCR en una nueva serie de 55 pacientes: hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-92b, hsa-miR-139, hsa-miR-1228, hsa-miR-1275, hsa-miR-3196. Los miRNAs hsa-miR-92b y hsa-miR-139 mostraron una peor supervivencia asociada a su represión y sobre-expresión, respectivamente. Entre sus genes diana, se seleccionaron receptores de membrana relevantes desde un punto de vista traslacional: HER4, GRIN2B, GRIN3A y GRM3 y se evaluó su expresión mediante qRT-PCR, mostrando GRIN2B una expresión mayor en mujeres jóvenes. Se midió la cantidad de proteína HER4 en 31 cortes de tejido tumoral de pacientes jóvenes y 29 de mayores de 65 años, mediante tinción inmunohistoquímica in situ, lo que confirmó que existe una mayor expresión de HER4, localizada en membrana, en mujeres jóvenes. Los resultados respaldan la idea de que el cáncer de mama en mujeres jóvenes constituye una entidad clínica y biológica diferenciada dentro del cáncer de mama general, con una etiología particular que responde a una desregulación de procesos celulares relacionados con proliferación, supervivencia celular, migración y movilidad celular, que merece una mayor atención de cara a ofrecer un tratamiento personalizado más acorde a las necesidades particulares de este grupo de pacientes.Breast cancer is the most frequent cáncer in women, afecting one in eight women in their lifetime. It is also the first invasive cancer derived cause of death in Spanish population (15.5%). Young women only account for the 3% of total diagnosed cases, however, this patients usually present larger tumors with higher proliferation and overrepresentated in more aggressive tumor subtypes. MicroRNAs (miRNAs) are small non coding RNA molecules that regulates gene expression by silencing the protein translation. MiRNA deregulation tipycally affects in various diseases, including cancer, and constitute a useful tool as a diagnosis and prognosis biomarker, due to their stability and reproducibility. The aim of this study was to stablish a molecular profile unique of breast cancer in very young women. With that purpose, 22 breast cancer patients younger than 35 years and 12 patients older than 65 years were selected, besides of 3 healthy women. None of the patients recived neoadjuvant treatment, were metastasic nor/or have known BRCA1/2 mutation. Using a miRNA Affymetrix microarray, the expression of 1100 miRNAs was assessed in tumoral tissue. 91 of those miRNAs showed differential expression in patients younger than 35 years. The analyses performed revealed a molecular profile distinctive of young women with breast cancer. The profile was validated on cell lines derived from mammary tumor of young women (HBL100, HCC1500, HCC1937). The analyses were also carried out on a dataset from 750 breast cancer patients obtained from a published study (METABRIC repository). Deregulated miRNAs in young women pointed out to target genes related with proliferation, cell survival, migration and cell motility pathways, and with cancer-related events. Eighteen representative miRNAs were selected, six of those were validated by qRT-PCR in an independent serie of 55 patients: hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-92b, hsa-miR-139, hsa-miR-1228, hsa-miR-1275, hsa-miR-3196. MiRNAs hsa-miR92b and hsa-miR-139 show differential survival prognosis when downregulated and upregulated, respectively. Among the target genes, relevant receptors were selected: HER4, GRIN2B, GRIN3A y GRM3 and their mRNA expression was measured using qRT-PCR assays. The results showed a higher expression of GRIN2B in tissue from young women. The HER4 protein was quantified by IHC in tumoral tissue from 31 young patients and 29 older patients, confirming a higher membrane expression of HER4 in young women. The results of this work support the idea that breast cancer in very young women constitutes a clinical and biological entity inside breast cancer, which particular etiology is due to the deregulation of cellular proceses related to proliferation, cell survival, migration and cell motility. Breast cancer in very young women, though, deserves utterly attention towards offering more focussed treatment that grants the needs of this particular group of patients