Cuantificación en tiempo real de la subunidad hTERT (Telomerase Reverse Transcriptase) del gen de la telomerasa en plasma de pacientes con cáncer colorrectal.

RESUMEN INTRODUCCIÓN: Los telómeros son estructuras compuestas por secuencias de DNA repetitivo y de proteínas, ubicadas en los extremos de los cromosomas que intervienen en su funcionamiento y mantienen su estabilidad. El DNA telomérico se acorta con cada división celular. La telomerasa es una enzima con actividad reverso-transcriptasa, que permite elongar el DNA de los telómeros durante la división celular, habiendo correlación entre la expresión del gen que sintetiza la subunidad hTERT y la actividad enzimática. La actividad telomerasa, es prácticamente indetectable en tejidos sanos y se encuentra aumentada en más del 85% de los cánceres (en el cáncer colorrectal, en el 90-100% de los casos). HIPÓTESIS DE TRABAJO: La determinación de la subunidad hTERT del gen de la telomerasa en plasma de pacientes con cáncer colorrectal, puede utilizarse como marcador tumoral. OBJETIVOS: Cuantificar en plasma de pacientes con cáncer colorrectal, la subunidad hTERT del gen de la telomerasa, mediante transcripción inversa-reacción en cadena de la polimerasa. Analizar el poder de discriminación de este marcador comparándolo con un grupo control. Valorar la correlación de la expresión hTERT con la edad y el sexo, los valores del CEA preoperatorio de los pacientes, el estadio tumoral y el grado de diferenciación tumoral. Determinar la actividad telomerasa en células tumorales, comparándola con células de mucosa sana de colon adyacente al tumor en un subgrupo de pacientes. MATERIAL Y MÉTODO: Se han incluido 81 pacientes intervenidos de cáncer colorrectal en el Servicio de Cirugía del Hospital Clínico Universitario de Valencia, la mediana de edad fue de 69 años, 51 eran varones. Como grupo control se seleccionaron 50 voluntarios con ausencia de patología neoplásica, la mediana de edad fue de 40 años, 25 eran varones. Se extrajeron 5-8ml de sangre venosa del antebrazo. Se ha cuantificado mediante espectrofotometría el RNA del plasma de la muestra, con transcripción inversa del mismo a DNA y posterior amplificación por Reacción en Cadena de la Polimerasa, obteniéndose la expresión del gen hTERT. Se determinó la actividad telomerasa en tejidos en 10 de los pacientes estudiados por método TRAP. En el estudio estadístico, los resultados se abordaron desde un enfoque no paramétrico, utilizándose el test de Spearman como prueba de correlación. Se determinó la sensibilidad y la especificidad del estudio confeccionando la curva ROC. RESULTADOS: El grupo con CCR ha obtenido un hTERT de 10.94, más elevado que en el grupo control que fue de 0.29 (p