Real time PCR for diagnosis of candidiasis

L'incidence des candidoses invasives est en augmentation depuis ces 30 dernières années ; notamment parmi les patients immunodéprimés. Ces infections à Candida sp., levure commensale du tube digestif, posent un problème diagnostic : colonisation ou véritable invasion ? Devant cette pathologie de pronostic péjoratif, il est nécessaire de fournir au clinicien un diagnostic précoce, rapide et précis permettant l'instauration d'une thérapeutique adaptée. Les outils actuels sont représentés par la culture, d'interprétation difficile selon le prélèvement, les hémocultures de sensibilité insuffisante et des méthodes sérologiques de performances modestes. Afin d'améliorer la sensibilité et la spécificité de ces tests, divers protocoles d'amplification génomique ont été publiés. L'objet de ce travail est le développement d'une technique originale de PCR SYBRGreen[marque déposée]en temps réel sur automate LightCycler[marque déposée]. La cible génomique retenue est l'ADN ribosomal 5.8 S. Notre stratégie diagnostique repose sur une première PCR d'orientation du genre Candida suivie, en cas de positivité, par une seconde amplification utilisant des amorces spécifiques d'espèces. Les 5 espèces de Candida recherchées ici sont les plus incriminées dans les candidoses à dissémination hématogène : Candida albicans, C. glabrata, C. parapsilosis, C. tropicalis et C. krusei. Après avoir développé notre technique sur des suspensions de levure, nous avons chercher à l'appliquer à du sang total de patient.Non disponible / Not availabl