Polisacáridos y variantes del virus Herpes simplex como herramienta en el esclarecimiento de la patogenia viral

Los carragenanos (CGNs), galactanos sulfatados aislados de algas rojas, han sido identificados como potentes inhibidores del virus Herpes simplex tipo 1 y 2 (HSV-1 y HSV-2) afectando principalmente la adsorción de HSV a la célula, etapa inicial del ciclo viral. Dado que presentan una similitud estructural con el heparan sulfato (HS), receptor celular que media la adsorción de HSV a la célula, actúan bloqueando la interacción virus-HS, en la que participan glicoproteínas de la envoltura viral. En estudios previos se seleccionaron y caracterizaron variantes virales sinciciales (syn) de HSV-1 (F) por pasajes sucesivos del virus en células Vero en presencia de un CGN natural 1C3 (de estructura relacionada con CGNs Iota (ι) y Kappa (κ)) con el fin de evaluar la capacidad de los CGNs de generar variantes virales resistentes durante el proceso de selección. En el presente trabajo se profundizó el estudio de la caracterización citopática y patogénica de las variantes 1C314-1 y 1C317-2. Las variantes mostraron un bajo nivel de resistencia a 1C3, heparina, aciclovir (ACV) y foscarnet (PFA). Las mismas resultaron avirulentas en ratones BALB/c infectados por vía intravaginal respecto de la cepa patrón que mostró alta mortalidad. La atenuación se correlacionó con bajos niveles de04:00 p.m. 22/12/2014 citoquinas pro-inflamatorias (TNF-α, IL-6) en lavados vaginales, aunque el título viral fue similar al obtenido con la cepa patrón. Por vía intranasal las variantes mostraron una marcada virulencia en ratones BALB/c, conduciendo a una generalizada diseminación viral. En ratones C57BL/6 resultaron avirulentas empleando las mismas vías de infección. Para evaluar la capacidad de generar variantes atenuadas con otro serotipo de HSV empleando la misma estrategia usada con HSV-1, se realizaron pasajes seriados de HSV-2 cepa MS en células Vero en presencia de concentraciones crecientes de CGNs ι y κ. Se seleccionaron 4 clones, ι22-9, ι22-12, κ22-12 y κ22-13, los cuales mostraron tener fenotipo syn, leve resistencia a los CGNs y a la heparina, pero variable susceptibilidad al ACV y al PFA. Todos los clones fueron menos virulentos que la cepa patrón (100% mortalidad) particularmente para ratones C57BL/6 por inoculación intravaginal e intranasal. La atenuación de las variantes de HSV-2 se correlacionó con altos niveles de TNF-α e IL-6 en lavados vaginales, y la infectividad cuantificada en los mismos fue similar a la obtenida con la cepa parental. Las variantes mostraron una replicación similar a la cepa parental en células Vero. Sin embargo, en cultivos primarios de astrocitos murinos mostraron un menor rendimiento viral. Los estudios in vitro realizados, mostraron que los CGNs ι y κ estimulan la proliferación celular y la liberación de citoquinas en macrófagos murinos (RAW264.7). Sin embargo, inoculados en ratones BALB/c por vía intravenosa no lograron elevar los niveles de citoquinas séricas. El conjunto de estos resultados indica que el sistema inmune innato, especialmente en la regulación de los niveles de TNF-α e IL-6, juega un rol de importancia en la patología del virus herpes simplex y apunta a considerar la posibilidad que este tipo de variantes virales tanto de HSV-1 como de HSV-2 emerjan durante las terapias antivirales basadas en CGNs