Tejido adiposo tímico como fuente de angiogénesis

El mayor reto de la ingeniería tisular por el momento es la inducción de una adecuada vascularización. Numerosos métodos se han utilizado para ello, pero con resultados insatisfactorios (Lovett M. y col.; 2009). El Tejido Adiposo, órgano endocrino activo con densa vasculatura, secreta una amplia cantidad de factores angiogénicos y adipogénicos y parece constituir una atractiva fuente de dichos factores bioactivos muy a considerar para las aplicaciones de ingeniería tisular. El tejido adiposo de timo (TAT) y sus células derivadas (células madre mesenquimales y progenitoras endoteliales derivadas del TAT), gracias a su potencial de diferenciación y su capacidad proangiogénica y antiapoptótica, pueden servir como fuente de angiogénesis de gran utilidad, en comparación con un tejido adiposo comúnmente usado para ese tipo de terapias como es el tejido adiposo subcutáneo (TAS), para ayudar en la neo-formación de los vasos sanguíneos y regeneración de los tejidos isquémicos en pacientes de edad avanzada con isquemia cardíaca. La grasa tímica podría ser una novedosa fuente de factores con gran capacidad para inducir la angiogénesis y un tejido del que obtener células madre mesenquimales y progenitoras endoteliales que ayudasen a la neoformación de vasos sanguíneos y a la regeneración de tejidos isquémicos. Desarrollo En sujetos de mediana (45-65 años) y tercera (>70 años) edad con cardiopatía isquémica (n=35) se realizó un análisis comparativo de los niveles de expresión génica (análisis de PCR cuantitativa a tiempo real) y proteica (inmunodetección por Western Blot) de los parámetros angiogénicos (VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C y VEGF-D), endoteliales (VEGF-R1, VEGF-R2 y VEGF-R3) y adipogénicos (PPARɣ2, ADRP y FABP4) del TAT y el TAS. Además, se llevó a cabo un análisis de citometría de flujo para cuantificar la expresión de marcadores endoteliales de superficie celular (Thy/CD90, CD29, CD49a/VLA1) en las células de la fracción vascular estromal de ambos tejidos adiposos en relación con el incremento de la edad. Para determinar el efecto fisiológico que poseen el TAT y el TAS para inducir la angiogénesis se utilizó un ensayo in vivo en la membrana corioalantoidea de codorniz (CAM). Por otro lado se llevó a cabo la caracterización de las células madre mesenquimales procedentes de TAT y TAS en relación con el incremento de la edad mediante ensayos de la capacidad de proliferación celular (curvas de crecimiento celular), ensayos de unidades formadoras de colonias fibroblastoides (CFU-assay), caracterización inmunofenotípica por citometría de flujo y evaluación cualitativa (tinciones específicas) y cuantitativa (análisis de PCR cuantitativa a tiempo real) del potencial de diferenciación hacia células de linaje adipogénico, osteogénico y endotelial. Finalmente se realizó un análisis de la capacidad de formación de túbulos de células endoteliales procedentes de la vena safena humana (HSaVEC) en medio condicionado generado por cultivos de células procedentes de la fracción del estroma vascular del TAT y TAS. Resultados En el TAT de sujetos de edad avanzada, los niveles de expresión génica de marcadores angiogénicos, endoteliales y adipogénicos se incrementaron en comparación con los sujetos de mediana edad, mientras que en el TAS estos parámetros decayeron; además, la expresión de CD31 y los VEGFs correlacionó significativa y positivamente con la edad en el TAT, correlación que fue negativa en el TAS. Por otro lado, la capacidad de inducción angiogénica mostrada por el TAT fue mayor que la del TAS con independencia de la edad del tejido implantado. Por ello, TAT constituye una potente, atractiva y prometedora fuente de actividad angiogénica en comparación con el TAS que no ve alterada sus características en función de la edad del paciente donador. A partir de Tejido Adiposo, tanto de timo como subcutáneo, es posible aislar colonias individuales con células adherentes de morfología fibroblastoide que pueden ser expandidas en cultivo y diferenciadas hacia células de linaje adipogénico, osteogénico y endotelial. La edad del paciente donador no afectó a la capacidad de diferenciación de las células madre mesenquimales de TAT. Estas células madre mesenquimales presentan una cinética de crecimiento celular normal equiparable al de células madre mesenquimales obtenidas a partir de otras fuentes. En el TAT, el doblaje poblacional no pareció verse afectado por el efecto de la edad del paciente, hecho que sí se intuyó en el TAS. Respecto a su caracterización inmunofenotípica, las células madre mesenquimales de nuestro estudio cumplieron con el criterio establecido por la ISCT y con otros aplicados para caracterizar colonias de células madre mesenquimales derivadas de Tejido Adiposo; además, en TAT encontramos presencia de marcadores de células progenitoras endoteliales lo que las podría dotar de mayor predisposición para su diferenciación hacia células endoteliales. Conclusión La glándula tímica puede perder su función inmunogénica con la vejez, pero esta involución podría consistir en el reemplazamiento de su composición inmunogénica por otra función, la de tejido adiposo. El TAT constituye una fuente de factores angiogénicos y de células madre mesenquimales con capacidad para diferenciarse en células endoteliales y es, probablemente, el candidato más adecuado para ser utilizado en terapia celular para sujetos con isquemia cardiaca