Estudo do papel de CITED2 na diferenciação das células estaminais embrionárias

Dissertação de mestrado, Biologia Molecular e Microbiana, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2015Cited2 é um modelador transcricional essencial para o desenvolvimento normal cardíaco. A manutenção, diferenciação e proliferação celular ocorrem e são controladas por uma rede complexa de vias de sinalização. No trabalho aqui apresentado pretende-se esclarecer de que forma a proteína Cited2 está envolvida na diferenciação de células estaminais embrionárias de ratinho em células cardíacas. O principal objetivo deste projeto consistiu em testar se Cited2 promove a diferenciação cardíaca por participar na expressão de moléculas de sinalização e se este meio é capaz de resgatar os defeitos de diferenciação das células estaminais embrionárias com deleção de Cited2. Para testar esta hipótese diferenciou-se células C2fl/fl[Cre]B, com e sem knockout de Cited2, durante as primeiras 48 horas, em meio condicionado de E14T/flag-CITED2 e efetuou-se contagens de focos contráteis. Analisou-se a expressão transcricional de genes relacionados com a diferenciação cardíaca em E14T/flag-CITED2. De acordo com os resultados obtidos neste estudo, a expressão e secreção de diversos fatores para o meio condicionado preparado a partir de ESC E14T/flag-CITED2 demonstra que, nas primeiras 48 horas de diferenciação, há a compensação da falta ou depleção Cited2 e observou-se que a sobre expressão de CITED2 nas células E14/T levou a um aumento de expressão transcricional de Wnt5a, Wnt11, Fgf10 e Dkk1