Valor prognóstico de características clinicopatológicas e imunofenotípicas em tumores mamários caninos

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaÀ semelhança do que é a realidade no universo da Medicina humana, a identificação de parâmetros relevantes a nível de prognóstico constitui uma área de investimento considerável na investigação do cancro mamário canino. Este trabalho pretende caracterizar tumores mamários caninos quanto às características epidemiológicas, clinicopatológicas e imunofenotípicas, avaliando o seu valor prognóstico pela investigação de associações significativas ou tendenciais entre si e incluindo as que dizem respeito aos estudos de sobrevivência [análise do tempo de sobrevivência (TS) e do tempo livre de doença (TLD)]. Pretende verificar também, em termos temporais concretos, como as diferenças em cada uma das características se traduz em termos de prognóstico. Os dados foram obtidos a partir de uma amostra de 41 cadelas que apresentavam tumores mamários. Os tumores foram analisados por avaliação histopatológica, pela avaliação da expressão de marcadores moleculares (Ki-67, RP, HER-2 e CK5/6) através de técnica imunohistoquímica e pelo estabelecimento de sua respetiva classificação molecular. Em termos epidemiológicos a nossa amostra mostrou-se perfeitamente concordante com a descrita em estudos anteriores. Em termos associativos foi possível concluir, a nível estatisticamente significativo, do pior prognóstico do maior tamanho tumoral, da metastização regional, do maior estadio tumoral TNM, da infiltração de células linfocíticas, dos tipos histopatológicos considerados de maior malignidade, do maior grau histológico de malignidade e da ausência de diferenciação mesenquimatosa. A expressão de Ki-67 como indicador de proliferação revelou-se de valor prognóstico importante, pela associação (estatisticamente significativa) da sua maior expressão às características anteriormente descritas como indicativas de pior prognóstico em si: o tamanho tumoral, o grau de malignidade, a necrose intratumoral, a metastização regional e, em termos epidemiológicos, a cadelas de raça indeterminada. O valor cut-off de 25% para o Ki-67 surgiu como o mais apropriado para o estudo do seu valor prognóstico (quando comparado com os cut-off alternativos de 20% e 16,43%-mediana) pelo número e significância de associações conseguidas. A maior expressão de RP surgiu associada significativamente aos tumores de cadelas inteiras e cadelas de raça indeterminada, assim como a tumores de tipo histológico simples e complexos e graus I e II de malignidade. Verificou-se uma sobre-expressão do marcador HER-2 em 19,4% dos tumores analisados, com uma maior frequência destes em carcinomas simples e de grau histológico III com infiltração linfocítica, não se chegando no entanto a associações estatisticamente significativas As CK5/6 tiveram expressão positiva quase ubiquitária, sendo os carcinomas de células escamosas o tipo histológico com uma maior percentagem de marcação. Dentro das associações estatisticamente significativas, no que diz respeito aos subtipos moleculares de acordo com o sistema de classificação adotado, os tipos Luminal A e B foram associados às cadelas de raça indeterminada, verificando-se uma maior significância quando considerado apenas o subtipo Luminal B. Este subtipo foi também associado à ocorrência de metastização. O subtipo Basal foi associado (quase significativamente) às cadelas previamente submetidas a OVH e, significativamente, a carcinomas de células escamosas. Os estudos de sobrevivência vieram, por análise dos diferenciais de tempo dos TS e TLD, corroborar as indicações fornecidas pelas associações. A nível significativo apenas o tamanho tumoral se revelou como indubitável fator de prognóstico para TS e TLD, e apenas considerando o cut-off de 3 cm. A nível quase significativo, foram validados como fatores de prognóstico de TS a classificação histopatológica (carcinomas simples/complexos), a infiltração linfóide, a metastização regional, o estadiamento TNM (I+II/III+IV) e o Ki-67 (cut-off de 25%) e como fatores de prognóstico do TLD a infiltração celular linfóide e a OVH simultânea à mastectomia. Quanto aos subtipos moleculares, o subtipo molecular HER-2 positivo apresentou sempre o pior prognóstico, sendo bastante aproximado do subtipo Basal, sendo os melhores prognósticos apresentados pelos subtipos moleculares Luminais. Os subtipos Luminais A e B apresentaram TS e TLD muito aproximados. Não se verificou conservação de características imunofenotípicas e, consequentemente, de subtipo molecular, dos tumores considerados primários para as suas metástases. Dadas as dificuldades encontradas na elaboração deste trabalho concluiu-se ser essencial a criação de guidelines mais detalhadas concernentes a todos os processos envolvidos no estudo da patologia desta afeção na espécie canina em particular.PROGNOSTIC VALUE OF CLINICOPATHOLOGIC AND IMMUNOPHENOTYPIC FEATURES IN CANINE MAMMARY TUMOURS - As in human medicine, the identification of relevant prognostic parameters constitutes a vast area of considerable investment in the canine mammary cancer study. This work intends the characterization of canine mammary tumors concerning the epidemiological, clinicopatologic and imunophenotipic characteristics, evaluating their prognostic value by the investigation of significative associations and tendencies between them and including the ones that concern the survival studies [overall survival (OS) and disease free survival (DFS)]. Furthermore, it aims to verify, in concrete temporal terms, how the differences in each characteristic translate in prognostic terms. The data were gathered from a sample of 41 bitches presenting mammary tomours. The tumors were analysed by histopathologic evaluation, the immunohistochemical expression of molecular markers (Ki-67, RP, HER-2 e CK5/6) and according to the respective molecular classification. Epidemiologically, our sample has proved to be perfectly accordant with previous studies. Considering the correlation studies, we were able to conclude, in a significant level, of the worse prognosis of the larger tumor size, the regional metastasis, the higher TNM stage, the lymphocitic infiltration, the histologic tumor types considered of higher malignancy, the higher histologic grade and the absence of mesenchimal differentiation. Ki-67 as the proliferation indicator has revealed itself of important prognostic marker, as its higher rate correlated (on a significant level) with the previously described characteristics of worse prognosis: tumour size, malignancy grade, intratumoral necrosis, regional metastasis and, epidemiologically, mixed breed bitches. The cut off value of 25% for Ki-67 stood up as the most appropriate to study its prognostic value (when compared with the 20% and 16,43% -median- alternative cut-offs) by the significance of associations. The biggest expression of PR was significantly associated to the tumors of biches of mixed breed and not sterilized, also as to simple and complex carcinomas and histological grades I and II. There was a HER-2 overexpression in 19,4% of the analysed tumors and there were several tendencies verified, such as a higher frequency in simple carcinomas, grade III carcinomas and lymphocitic infiltration, even though we couldn´t find any significant correlations. Citokeratins 5/6 had an almost ubiquitous expression, with squamous cells carcinomas being the ones with the highest percentage of marked cells. Considering the molecular subtypes, according to the adopted classification system, the Luminal A and B were correlated with mixed breed biches, with an increase of the significance level when considered the Luminal B subtype alone. This subtype was also correlated with the occurrence of regional metastization. Basal subtype was correlated (almost significantly) with ovariectomized bitches and, significantly, to scamous cells carcinomas. Considering the survival studies, on a statistical significant level, only the tumour size was undoubtedly revealed as prognostic factor for OS and DFS, and only when considered the 3 cm cut-off. On a statistical significant level, histopathological classification (simple/complex carcinomas), lymphocitic infiltration, regional metastization, TNM staging (I+II/III+IV) and Ki-67 (25% cut-off) were validated as OS prognostic factors. As for DFS, only lymphocitic infiltration and OVH simultaneous to mastectomy were found. As regards for the molecular classification, the HER-2 overexpression subtype presented the worst prognosis, both in OS and DFS, being quite close to the Basal subtype. The best prognosis were presented by the Luminal subtypes which were, between them (Luminal A and B) very similar in OS and DFS. We didn’t observe any conservation of immunophenotypic traits or molecular subtypes from the primary tumour to its metastasis. Given the difficulties found in the elaboration of this work, we consider as essential the existence of more detailed guidelines concerning the processes involved in the study of the pathology of this disease in this particular species