Molecular-genetic characterization of Stevia rebaudiana processed materials using microsatellite technique

Stevia rebaudiana es una planta herbácea perenne que pertenece a la familia Asteraceae. Es originaria del norte de Paraguay y crece en climas tropicales y subtropicales. Debido a la dulzura natural de sus hojas, se le conoce como edulcorante natural, sin calorías y con muchas aplicaciones en la industria alimentaria. Por lo tanto, resulta de gran importancia comercial contar con técnicas que permitan determinar la calidad y pureza de la materia prima procesada en polvo para la producción de edulcorantes. Se ha recurrido a la implementación de técnicas moleculares mediante marcadores ISSR, que permiten amplificar las secuencias que se encuentran entre los microsatélites, con lo que se obtiene un patrón de bandas característico de cada organismo. En este estudio se analizó la amplificación de los ISSR S3, S4, S5, S10, S11, S12 y S15 a partir de muestras de ADN de S. rebaudiana, provenientes de plantas cultivadas en invernadero. Las muestras de ADN se obtuvieron mediante tres diferentes protocolos de extracción a partir de material seco y fresco de la planta. De acuerdo con los resultados obtenidos, los ISSR S3, S4, S5 y S11 representan una buena opción para la detección de polimorfismos en esta especie, y por tanto para la identificación molecular de la especie. Se debe comprobar si los ISSR S10, S12 y S15 son capaces de amplificar segmentos de ADN de Stevia, ya que bajo las condiciones de trabajo de esta investigación no se logró la amplificación de ADN con estos imprimadores. Se considera que los ISSR son marcadores universales y se podría identificar individualmente cada cultivar de Stevia que vaya a destinarse a la producción comercial de esteviósidos, pero es necesario repetir los protocolos descritos con diferentes variedades e incluso se puede trabajar con diferentes especies del género Stevia, para obtener una caracterización general. Stevia rebaudiana is a herbaceous and perennial plant belonging to the Asteraceae family, it is native of Paraguay and grows in tropical and subtropical climates. Due to the natural sweetness of its leaves, is known as a natural sweetener with no calories and with many applications in food industry. Therefore, it is of great commercial importance to have techniques for determinate the quality and purity of the raw material processed into powder for the production of sweeteners. Been used for the implementation of molecular markers ISSR, enabling amplify sequences that are between the microsatellites, which yields a characteristic banding pattern for each organism. In this study we examined the amplification of ISSR S3, S4, S5, S10, S11, S12 and S15 from DNA samples of S. rebaudiana, from greenhouse-grown plants. DNA samples were obtained by three different extraction protocols from dry and fresh material from the plant. According to the results, the ISSR S3 , S4, S5 and S11 are a good choice to detect polymorphisms in this species, and therefore the molecular identification of the species. It is necessary to check whether the ISSR S10, S12 and S15 are able to amplify DNA segments in stevia , since under the conditions of this research work was not successful DNA amplification with these primers. It is considered that ISSR markers are universal and could be used to identify every stevia cultivate for commercial production of stevioside , but it is necessary to repeat the protocols described with different varieties and work with different species of the genus Stevia sp., to obtain a general characterization