Comparación de tres métodos de extracción y purificación de ADN a partir de restos óseos para análisis forense.

Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología). Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela de Biología, 2009.La extracción de ADN a partir de hueso implica la utilización de metodologías complejas debido a problemas como la degradación, las cantidades limitantes de ADN y la presencia de sustancias inhibidoras que pueden ser co-extraídas con el ADN. En el Laboratorio de Genética Forense del OIJ se ha dificultado la estandarización de un protocolo útil para extracción y análisis de ADN de alta calidad y cantidad. Con el fin de encontrar un método que proporcione las mejores condiciones de extracción, purificación y amplificación de ADN, se realizó la comparación de tres metodologías de extracción de ADN a partir de restos óseos, entre ellas el método de desmineralización, el método orgánico utilizado actualmente en el laboratorio, procedente del FBI y el Kit comercial Qiagen Blood Maxi Kit. También se efectuó la comparación de técnicas de purificación adicionales en los protocolos de desmineralización y FBI. La desmineralización mostró ser un método prometedor para la extracción y amplificación de ADN de restos óseos presentado los mejores resultados de cuantificación; mientras que las columnas Centricon® YM-50 mostraron las mejores condiciones para la concentración y purificación de ADN. En el método del FBI es más recomendable realizar la purificación de los extractos con dispositivos de ultrafiltracción Centricon® YM-100. Mediante este trabajo se demostró que el método de extracción, así como el diámetro de poro de las columnas de purificación y el fundamento de filtración son factores determinantes en el éxito del proceso