Proceso de infección de Rosellinia Necatrix en aguacate y determinación del antagonismo (antibiosis y micoparasitismo) de Trichoderma SPP., en el control biológico de la podredumbre blanca radicular

El objeto de la tesis es el estudio del biocontrol de Rosellinia necatrix agente causal de la podredumbre blanca (PB) de raíz del aguacate mediante el uso de agentes de biocontrol (ABC), siendo los objetivos de la misma: 1) Definir los puntos de actuación de R. necatrix en plantas de aguacate para aplicar el biocontrol de la PB, 2) Testar el efecto de toxinas de R. necatrix sobre plantas de aguacate, 3) Evaluar el efecto in vitro e in vivo de metabolitos de Trichoderma spp. sobre R. necatrix, 4) Estudiar las posibles relaciones de micoparasitismo de Trichoderma spp. sobre R. necatrix, 5) Analizar la actividad enzimática glucanasa y quitinasa, de Trichoderma spp. en presencia de R. necatrix y 6) Seleccionar nuevos aislados no patogénicos de R. necatrix como ABC sobre la PB del aguacate. Es de vital importancia determinar claramente la zona de actuación de R. necatrix en plantas de aguacate para definir dónde se debe dirigir la acción de los ABC. En estudios previos se ha demostrado que R. necatrix infecta plantas de aguacate penetrando en sus raíces en varios puntos preferentemente a nivel del cuello de la planta así como a través de lenticelas y entre células epidermales, y también penetra en el xilema primario y secundario, pero no se han realizado estudios para discernir la posible translocación del hongo en el sistema vascular de la planta. Para ello se realizaron cortes trasversales en tallos de plantas de aguacate inoculadas previamente con 70 aislados de R. necatrix, así como análisis de PCR de las hojas de las plantas inoculadas, con primers específicos R3 y R8 para este hongo. Los resultados en ambos casos fueron negativos demostrándose que R. necatrix no invade el sistema vascular de la planta y no se transloca a través de ella hasta la parte aérea. Además se estudió el efecto sobre plantas de aguacate de las toxinas citocalasina E y rosnecatrone que fueron obtenidas de seis aislados de R. necatrix. Para ello, se inocularon plantas de aguacate procedentes de cultivo de embriones in vitro con soluciones de citocalasina E a distintas concentraciones y se midió su efecto en las hojas de las plantas inoculadas y control sin inocular, a través de la emisión de fluorescencia. Se observó que en las plantas inoculadas ésta fue mayor que en las no inoculadas, de lo que se deriva que la eficiencia fotosintética es menor en aquellas. Por tanto parece...The aim of this work was to study the control of Rosellinia necatrix, causal agent of white root rot (WRR), using biocontrol agents (BCA). The objectives were 1) to define the action points of R. necatrix on avocado plant to apply the biocontrol of WRR, 2) to test the effect of toxins produced by R. necatrix on avocado plants, 3) to evaluate the in vitro and in vivo effects of Trichoderma spp. metabolites on R. necatrix, 4) to study if there is mycoparasitism of Trichoderma spp. on R. necatrix 5) to analyze the enzymatic activity (glucanase and chitinase) of Trichoderma spp. in the presence of R. necatrix and 6) to select new non-pathogenic isolates of R. necatrix as biocontrol agents (BCA) on the WRR. In order to define areas where we should act with BCA it is important to define the action zone of R. necatrix. Previous studies have shown that R. necatrix infects avocado plants roots by penetrating at several points in the crown of the plant and through lenticels and between epidermal cells, and it also penetrates into the primary and secondary xylem, but no studies have been carried to determine if there is translocation of the fungus in the plant vascular system. Transversal cuts were made in avocado plant stems previously inoculated with 70 isolates of R. necatrix, and PCR analysis was carried out on leaves of plants inoculated with primers specific to the fungus. The results in both cases were negative showing that R. necatrix does not invade the plant vascular system and it is not translocated to the aerial part. Toxins produced by six R. necatrix isolates were studied, cytochalasin E was obtained from all isolates and rosnecatrone only in two. Avocado plants in vitro were inoculated with cytochalasin E solutions at different concentrations and their effect was measured by fluorescence emission in leaves of inoculated and control non-inoculated plants. Fluorescence emission was higher on inoculated plants than in the non-inoculated, thus the photosynthetic efficiency is lower in plants inoculated with the toxin. It seems that there is a relationship between the effect of the pathogen in the aerial part of the avocado plant and the generation of toxins by the fungus, possibly toxins migrate from roots to leaves. These toxins adversely affect the photosynthesis process, which was indirectly measured by fluorescence emission, and probably contribute to wilting and..