Nouvelle architecture de la jonction adhérente endothéliale

Tumoral cells as leucocytes get through the vascular endothelium across adherens junctions, mainly composed of VE-cadherin. This transmigration process disturbs transiently the junctions, impairing so the endothelium integrity.To understand the mechanisms leading to the opening of adherens junctions, we first determined the proteic composition of the VE-cadherin-based complex of primary endothelial cell (HUVEC) mature adherens junctions. To do so, we developed a method coupling immunoprecipitation and mass spectrometry-based proteomic analysis (LC-nanoESI-MS/MS). Partners of VE-cadherin, so far unknown such as annexin 2 and moesin, were so identified.Our results demonstrated that, in confluent HUVECs, the VE-cadherin-based complex interacts with annexin 2 and that annexin 2 translocates from the cytoplasm to the plasma membrane as cell reach confluence. Annexin 2, located in cholesterol rafts, binds both to the actin cytoskeleton and the VE-cadherin-based complex so the complex is docked to cholesterol rafts. These multiple connections prevent the lateral diffusion of the VE-cadherin-based complex thus strengthening adherens junctions in the ultimate steps of maturation. Moreover, we observed that the down-regulation of annexin 2 by siRNA induces a delocalization of VE-cadherin from adherens junctions and consequently a destabilization of these junctions. Furthermore, our data suggest that the decoupling of the annexin 2/p11 complex from the VE-cadherin-based junction, triggered by Vascular Endothelial Growth Factor facilitates the switch from a quiescent to an immature state.Moesin seems to interact with the VE-cadherin-based complex in immature junctions of sub-confluent HUVECs. Moesin might be involved in production of early cell-cell contact rather than in adherens junction maturation.Les cellules tumorales, comme les leucocytes, franchissent l'endothélium vasculaire au niveau des jonctions intercellulaires à l'endroit même où s'exprime la VE-cadhérine, la protéine majeure des jonctions adhérentes. Cette transmigration déstabilise transitoirement les jonctions, ce qui affecte l'intégrité de ce tissu.Afin de comprendre les mécanismes sous-jacents à l'ouverture des jonctions, nous avons établi la composition protéique du complexe à base de VE-cadhérine des jonctions adhérentes matures de cellules endothéliales primaires confluentes de type HUVEC. Pour cela, nous avons couplé immunoprécipitation et analyse protéomique par spectrométrie de masse (LC-nanoESI-MS/MS). Nous avons ainsi identifié de nouveaux partenaires du complexe à base de VE-cadhérine jamais identifiés auparavant au niveau de la jonction adhérente endothéliale. Parmi ceux-ci se trouvent des protéines liant l'actine telles l'annexine 2 et la moésine.Nos résultats indiquent que l'annexine 2, qui s'accumule à la membrane plasmique au niveau des radeaux de cholestérol, entre en interaction directe avec le complexe à base de VE-cadhérine. Ainsi, l'annexine 2 connecte le complexe jonctionnel à base de VE-cadhérine au cytosquelette d'actine dans les HUVEC confluentes. L'utilisation de siRNA nous a permis d'établir que l'expression de l'annexine 2 est absolument nécessaire au maintien de la VE-cadhérine à la membrane plasmique. Nos résultats suggèrent que l'annexine 2, connectée à l'actine, arrime le complexe à base de VE-cadhérine au niveau des radeaux de cholestérol. En limitant la diffusion membranaire du complexe jonctionnel, ces interactions aboutissent à une consolidation des jonctions adhérentes ce qui contribue à maintenir l'intégrité de l'endothélium vasculaire. Lorsque les HUVEC sont soumises à des molecules destabilisant les jonctions adhérentes, une délocalisation de l'annexine 2 de la membrane vers le cytosol et une perturbation de la localisation de la VE-cadhérine sont observés. Ceci suggère que le prérequis à l'ouverture des jonctions adhérentes nécessite une rupture de l'interaction existant entre le complexe à base de VE-cadhérine et l'annexine 2.La moésine, quant à elle, semble interagir avec le complexe à base de VE-cadhérine dans les jonctions immatures formées entre cellules sub-confluentes. La moésine serait donc impliquée dans l'établissement des contacts intercellulaires précoces plutôt que dans la maturation des jonctions endothéliales