VE-cadhérine dans l'inflammation et le cancer: phosphorylation et clivage

Vascular endothelial (VE) cadherin, a specific adhesive protein located at sites of endothelial intercellular contact, is required for junction integrity, vascular morphogenesis, and angiogenesis. We recently demonstrated that VE-cadherin was tyrosine phosphorylated in vivo in angiogenic conditions and not in quiescent endothelium. Tyrosine 685 is the only target for Src kinase in the VEGF pathway. Thus, phospho-VE-cadherin is characteristic for activated endothelium. The present study was designed to examine whether VE-cadherin was phosphorylated in tumoral angiogenesis in vivo, using two models of murine tumors: hepatocellular carcinoma model of mice with previous described hyperangiogenesis and glioblastoma model of rat brain with increased vascular permeability. I found the same tyrosine phosphorylation of VE-cadherin in both models of tumors and the site identified was Y658. To further investigate the mechanism of VE-cadherin phosphorylation, we used cultured cells stimulated with TNF because of the described role of Y658 in vascular permeability and extravasation of leukocytes and the related presence of inflammation in both models. I found that VE-cadherin is phosphorylated on Y658 with TNF and the kinase responsible for this phosphorylation was SYK (SiRNA of Syk, mutagenesis of VE-cadherin Y658 cytoplamsic domain). Because VE-cadherin is susceptible for extra-cellular domain proteolysis in response to TNFα, we studied in parallel the presence in cancer and inflammatory pathologies patients sera the presence of circulating VE-cadherin. VE-cadherin could be a feature of activated endothelium both by phosphorylation and proteolysis.L'endothélium vasculaire est la première couche de cellules en contact avec le flux sanguin. Au cours de processus pathologiques, les cellules endothéliales subissent des remaniements notoires dus à la présence de nombreux facteurs. Dans ce cas, l'intégrité de l'endothélium, assurée principalement par les jonctions adhérentes endothéliales dont la V(ascular)E(ndothelial)-cadhérine est la protéine clé, est perturbée. La phospho-VE-cadhérine est une caractéristique des cellules endothéliales activées in vitro. Notre laboratoire a montré l'existence d'une forme phosphorylée de VE-cadhérine in vivo au cours de l'angiogenèse physiologique. Des tyrosines importantes ont été identifiées : la tyrosine 685, qui est la cible directe de la tyrosine kinase Src en réponse au VEGF ainsi que les tyrosines 658 et 731. De plus, la VE-cadhérine peut être sensible à la protéolyse. Dans ce travail, la phosphorylation de la VE-cadhérine a été étudiée dans un contexte pathologique d'inflammation et de cancer à l'aide de deux modèles murins de tumeurs hépatiques ou cérébrales. J'ai démontré l'existence in vivo d'une forme phosphorylée de VE-cadhérine sur le site Y658. L'analyse d'une tyrosine kinase particulière, Syk, par si RNA ainsi que par des expériences de phosphorylation in vitro suggèrent fortement l'implication de SYK dans cette phosphorylation. En parallèle, dans le cadre d'une étude sur plusieurs pathologies, nous avons mis en évidence la présence d'une forme circulante de VE-cadhérine. La VE-cadhérine, tant par sa phosphorylation que par sa présence dans les fluides biologiques, pourrait être une signature de l'endothélium activé (phosphorylation) et/ou agressé (protéolyse)