Facteurs génétiques impliqués dans la différenciation de l'endoderme primitif au cours du développement préimplantatoire chez la souris

Numerous studies on the mouse embryo have allowed to caracterize the morphological events occuring at early development. Our groups aims to clarify the mechanisms of preimplantation embryogenesis in the mouse, focusing on the differentiation of the primitive endoderm (PrE). The PrE is the second extraembryonic tissue formed before implantation and required for both survival and correct development of the embryo. In order to get a better understanding of how PrE fate is established and the epitelium formed, I focused my study on two signaling pathways : retinoic acid signaling and the Wnt/β-catenin pathway. I analysed the expression of PrE and epiblast markers on a RA-driven F9 cell differentiation by quantitative RT-PCR. I show that PrE-genes are sequencially induced and in the same order as observed in vivo by immunostaining. I also adapted this protocol for preimplantation embryos. By in situ hybridations and immunostainings I characterized the expression profils of different members of the two signaling pathways.Les études menées depuis de nombreuses années sur l'embryogenèse de la souris ont permis sa caractérisation morphologique. Le but de notre équipe est de participer à l'élucidation des facteurs jouant un rôle important dans le développement préimplantatoire murin. Pour cela, nous nous sommes focalisés sur un des 1ers types cellulaires déterminé à ces stades : l'endoderme primitif (EPr). L'EPr est un tissu extra-embryonnaire formant un épithélium indispensable au bon déroulement du développement et à la survie de l'embryon. Afin de mieux caractériser les facteurs génétiques et voies de signalisations impliquées dans la différenciation de l'EPr chez la souris, je me suis intéressée à la signalisation rétinoïque ainsi qu'à la voie Wnt canonique. J'ai tout d'abord analysé l'expression des marqueurs de l'EPr et de l'épiblaste (le tissu embryonnaire) par RT-PCR quantitative au cours de la différenciation de cellules F9 en cellules de l'EPr par l'acide rétinoïque. Ainsi, j'ai montré que les marqueurs endodermiques sont induits séquentiellement et dans le même ordre que in vivo. J'ai également adapté ce protocole aux embryons préimplantatoires. Grâce à l'hybridation in situ et l'immunohistochimie j'ai caractérisé les profils d'expression de différents acteurs de la voie des rétinoïdes ainsi que de Dkk1 un inhibiteur spécifique de la voie Wnt canonique