Role of diacylglycerol receptors during activation and proliferation in t lymphocytes

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid. Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 15-12-2003La homeostasis inmunológica es un proceso que debe estar finamente regulado. Los linfocitos T de la sangre son los responsables de defender al organismo frente a agresiones externas así como de tumores, pero también pueden llegar a alterar su función y derivar en procesos tumorales generando leucemias, linfomas y otros estados patológicos. Por ello es importante conocer qué señales median los procesos de activación y proliferación linfocitarios a modo de poder controlarlos de manera específica en caso de alteraciones. El segundo mesajero lipídico diacilglicerol, así como sus principales receptores moleculares, las proteínas quinasas C han demostrado ser muy importantes en todos los procesos celulares, siendo claves para transmitir la señal desde los receptores en superficie hasta el núcleo generando las distintas respuestas celulares. La función, distribución y mecanismo de activación son específicos para cada isoforma de PKC y viene determinado por sus dominios reguladores, que en el caso de las nuevas, que se tratan en profundidad en esta tesis, unen diacilglicerol. En la activación linfocítica, la isoforma e de las PKCs se ha visto implicada en mediar las señales generadas tras unión del receptor específico de células T al antígeno. Nuestros resultados demuestran que el mecanismo de activacion de esta isoforma es diferente al descrito para las demás PKCs implicando la fosforilación en un residuo de tirosina mediado por la tirosina quinasa Lck, así como la unión del diacilglicerol generado por la fosfolipasa C-y (PLCy). La confluencia de ambas señales permite que la proteína se asocie a la sinapsis que se forma en el punto de contacto del linfocito con la célula presentadora de antígeno, que es donde se inicia la respuesta temprana del linfocito. La proliferación de linfocitos T no requiere de la activación de la fosfolipasa C, lo que llevó a concluir que dicho proceso no requería de la activación de las PKCs. Nuestros resultados, sin embargo, demuestran que tres isoformas están reguladas durante dicho proceso. La isoforma E resulta activada durante la proliferación inducida por la interleuquina-2, sin embargo, no es imprescindible para dicha función. Por otro lado, las isoformas C y ti son necesarias para que la proliferación tenga lugar en linfocitos y son capaces de mantener niveles altos de proliferación en ausencia de IL-2 cuando las células son tratadas con ésteres de forbol. Estudios recientes han demostrado que cuando se activa la fosfolipasa C y se genera diacilglicerol, este segundo mensajero puede activar, no sólo las PKCs sino tambien otras proteínas receptoras de DAG carentes de actividad quinasa. Esta evidencia ha hecho que iniciemos el análisis en linfocitos T de algunos de estos otros receptores para DAG. Nuestros resultados indican que los linfocitos T expresan la isoforma p de las quimerinas, con actividad GAP para Rac. Esto sugiere un papel para las quimerinas en los procesos que requieren reordenamiento del citoesqueleto. Hemos iniciado la caracterización de los dominios funcionales de esta enzima, así como su regulación en respuesta a diferentes estímulos. Este estudio nos permitirá ir conociendo de manera más detallada su mecanismo de activación y a través de este el papel de esta nueva familia de enzimas en la regulación de la respuesta inmune