Study of the different genotypes of small ruminants lentiviruses in Brazil and their relationship with clinical manifestations

O vírus do Maedi-visna (MVV) e da artrite encefalite caprina (CAEV) são atualmente denominados como lentiviroses de pequenos ruminantes (LVPR). É uma enfermidade viral caracterizada por alta variabilidade genética e longo período de incubação, afetando negativamente a ovinocaprinocultura. O objetivo do estudo foi determinar a ocorrência dos diferentes genótipos de LVPR nos rebanhos caprinos e ovinos do Brasil e relacionar com os achados clínicos. Foram coletadas amostras de sangue de 708 animais (236 ovinos e 472 caprinos) em 21 rebanhos dos Estados de Pernambuco e São Paulo. O diagnóstico sorológico foi determinado pelas técnicas de imunodifusão em gel ágar (AGID - Biovetech Kit®, Recife, PE, Brasil) e/ou ELISA indireto (Eradikit™ SRLV, IN3 Diagnostics, Torino, Itália). Um questionário com perguntas fechadas e ficha de exame físico foi aplicado em cada propriedade com a finalidade em obter informações voltadas aos parâmetros de manejo e saúde dos animais, respectivamente. Todas as amostras soropositivas foram selecionadas para a realização do diagnóstico molecular. O DNA proviral foi primeiramente analisado por um PCR hemi-nested (1.3 kb gag-pol), e as amostras com resultados negativos foram testadas pelo PCR nested (0.8 kb gag-pol). As amostras positivas ao PCR hemi-nested ou PCR nested foram também submetidas ao segundo PCR nested (pol 1.2 kb). Os fatores de risco foram determinados por regressão logística binária por análise univariada pelo teste Qui-quadrado de Pearson ou Exato de Fisher, considerado como variável dependente a soropositividade para LVPR. As variáveis sem ausência de colinearidade e com p≤0,2 foram selecionadas e incluídas no modelo de regressão logística multivariada. Foi observada uma soropositividade de 25,0% (118/472) em caprinos e 1,3% (03/236) em ovinos, sendo que 47,3% (10/21) dos rebanhos apresentaram pelo menos um animal soropositivo. A criação consorciada (odds ratio= 6,35; IC95%= 3,67-11,01; p= 0,001), raça Saanen (odds ratio=8,37; IC95%=2,45- 28,61; p=0,001) e presença de animais com artrite (odds ratio=6,60; IC95%= 2,43-17,84; p=0,0001) foram identificadas como fatores de risco associados com a ocorrência de LVPR, enquanto que a prática de desinfecção de utensílios perfurocortantes (odds ratio=0,145; IC95%= 0,084-0,249; p=0,001) foram considerados como fatores de proteção para a doença. De 121 amostras soropositivas, apenas 42 foram positivas pelo PCR, o que pode ser explicado por falhas na amplificação viral provavelmente devido a variabilidade genética de cepas circulantes locais e a baixa carga proviral em animais assintomáticos. No ELISA Eradikit Genotyping, 21 (72,4%) amostras de soro foram classificadas como genótipo B e 8 (27,6%) foram indeterminadas. Ressalta-se a importância da avaliação futura de um maior número de animais pela sorotipagem, uma vez que essa técnica auxilia na detecção do genótipo nos rebanhos presentes nas diferentes regiões geográficas do Brasil. O subtipo B1 foi identificado por genotipagem em quatro caprinos e a possibilidade da ocorrência do subtipo A1 em ovino que apresentava histórico de desconforto respiratório, porém há a necessidade de sequenciamento de outras regiões do gene gag e pol para sua confirmação. Os resultados do presente estudo evidenciaram a ampla disseminação de focos de infecção para LVPR e a necessidade da aplicação de ferramentas laboratoriais de maior precisão para a ampla caracterização de genótipos circulantes em rebanhos caprinos e ovinos do Brasil, uma vez que essa etapa é fundamental para a seleção de antígenos para os testes de diagnóstico sorológico e aperfeiçoamento das estratégias de controle da doença.Maedi-visna virus and caprine arthritis encephalitis virus are currently known as small ruminant lentiviruses (SRLV). It is a viral disease characterized by high genetic variability and long incubation period, negatively affecting sheep and goat farming. The objective of the study was to determine the occurrence of different SRLV genotypes in goat and sheep herds in Brazil and relate them to clinical findings. Blood samples were collected from 708 animals (236 sheep and 472 goats) in 21 herds in the states of Pernambuco and São Paulo. The serological diagnosis was determined by agar gel immunodiffusion techniques (AGID - Biovetech Kit®, Recife, PE, Brazil) and/or indirect ELISA (EradikitTM SRLV, IN3 Diagnostics, Turin, Italy). A questionnaire with closed questions and a physical examination form was applied to each property in order to obtain information related to the management and health parameters of the animals, respectively. All seropositive samples were selected for molecular diagnosis. Proviral DNA was first analyzed by hemi-nested PCR (1.3 kb gag-pol), and samples with negative results were tested by nested PCR (0.8 kb gag-pol). Samples positive for hemi-nested PCR or nested PCR were submitted to the second nested PCR (1.2 kb). Risk factors were determined by binary logistic regression by univariate analysis using Pearson’s chi-square test or Fisher’s exact test, seropositivity for SRLVs being considered as the dependent variable. Variables without absence of collinearity and with p≤0.2 were selected and included in the multivariate logistic regression model. A seropositivity of 25.0% (118/472) was observed in goats and 1.3% (03/236) in sheep, and 47.3% (10/21) of the herds had at least one seropositive animal. The mixed breeding (odds ratio= 6.35; CI95%= 3.67- 11.01; p= 0.001), Saanen breed (odds ratio=8.37; CI95%=2.45-28.61; p= 0.001) and the presence of animals with arthritis (odds ratio=6.60; CI95%= 2.43-17.84; p=0.0001) were identified as risk factors associated with the occurrence of SRLV, while the practice disinfection of sharps (odds ratio=0.145; CI95%= 0.084-0.249; p=0.001) were considered as protective factors for the disease. Of 121 seropositive samples, only 42 were positive by PCR, which can be explained by failures in viral amplification, probably due to the genetic variability of local circulating strains and the low proviral load in asymptomatic animals. In the Eradikit Genotyping ELISA, 21 (72.4%) serum samples were classified as genotype B and 8 (27.6%) were indeterminate. The importance of future evaluation of a larger number of animals by serotyping is emphasized, since this technique helps in the detection of the genotype in herds present in the different geographic regions of Brazil. The B1 subtype was identified by genotyping in four goats and the possibility of the occurrence of the A1 subtype in a sheep that had a history of respiratory distress, but there is a need for sequencing of other regions of gene gag and pol for confirmation. The results of the present study showed the wide dissemination of infection foci for SRLV and the need to apply more precise laboratory tools for the broad characterization of circulating genotypes in goat and sheep herds in Brazil, since this step is fundamental for the selection of antigens for serological diagnostic tests and improvement of disease control strategies