IZOLACIJA I PROCJENA KVALITETE DNA IZ KRVNIH I TKIVNIH UZORAKA S PRIMJENOM U TIPIZACIJI GENA HLA

Molekularna tipizacija gena HLA je pretraga koja se u transplantaciji solidnih organa provodi kako bi se omogućio odabir imunološki najboljih primatelja organa. Za testiranje je potrebna DNA visoke čistoće i kvalitete, koja se rutinski izolira iz uzorka venske krvi, no i iz tkivnih uzoraka kadaveričnog davatelja organa. Cilj istraživanja bio je usporediti koncentraciju i čistoću DNA izolirane iz limfnog čvora i iz slezene 20 kadaveričnih davatelja organa te usporediti uspješnost rezultata tipizacije HLA na lokusima HLA-A, -B, -C, -DRB1. Provedena je i izolacija DNA iz jednog uzorka bioptata bubrega u parafinskoj kocki. Za izolaciju DNA korištene su automatska izolacija na dva različita uređaja te ručna izolacija DNA komercijalnim kitom. Rezultati pokazuju da je iz svih uzoraka i limfnih čvora i slezene izolacija DNA bila uspješna, ali DNA izolirane iz slezene imale su veću koncentraciju, veću čistoću te bolju uspješnost rezultata tipizacije od DNA izoliranih iz limfnog čvora. DNA izolirana iz uzorka bioptata bubrega bila je niske koncentracije i nezadovoljavajuće čistoće, ali je rezultat tipizacije HLA bio pogodan za analizu. Zaključno, sve tri testirane vrste tkivnih uzoraka, limfni čvor, slezena i bioptat bubrega, omogućavaju izolaciju DNA zadovoljavajuće koncentracije i čistoće za testove tipizacije HLA