Inhibitory effects of Propolis on human osteogenic sarcoma cell proliferation mediated by caspase patway

A natural product Propolis, is a resinous material gathered by honeybees from the buds and bark of certain trees and plants. Propolis contains various chemical components of biological activities, including antimutagenic, antioxidant, antibacterial, antiviral and anticarsinogenic. Therefore, the aim of this study is to investigate the antiapoptotic effect of propolis extracts (PE) using caspase pathway in the human osteogenic sarcoma cell line SAOS-2 in culture. The extracts which produced in ecologic environment were taken from the Hacettepe University, Beytepe Campus area-Ankara were used. Seven different PE at 0.5, 0.25, 0.125 and 0.063 mg/ml were added to SAOS-2 cell line for two days incubation. For cell proliferation and cytotoxicty analyses MTT, for apoptotic cell death determination TUNEL method, for distribution of caspase 6, caspase 8 and caspase 9 indirect immunocytochemistry analyses were used. After MTT analyses, the most effect was observed PE 7 at the 0.125 mg/ml dilution. The number of TUNEL positive cells was more detectable at PE 4 and 5 at the 0.063 mg/ml, and PE 7 at the 0.125 mg/ml dilutions. The immunoreactivity of caspase 6 was stronger than caspase 8 and 9. Moreover, density of caspase 6 staining was much better especially in PE 7 at the 0.125 mg/ml dilution. In conclusion, the mechanisms of apoptosis induction by PE may appear via caspase pathway because of its anticanserogenic effect. PE may be usefull in the cancer treatment protocol.Doğal bir ürün olarak propolis belli ağaç ve bitkilerin kabuki ve tomurcuklarından arılar aracılığı ile elde edilen bir reçine materyalidir. Propolis antimutajenik, antioksidan, antibakteriyel, antiviral etkileride içeren biyolojik aktiviteleri olan çeşitli kimyasal bileşikleri içerir. Bu nedenle bu çalışmada insan osteojenik sarcoma hücre dizini SAOS-2 kültüründe kaspaz yolağı kullanılarak propolis ekstraktlarının (PE) antiapoptotik etkisi araştırılması amaçlandı. Ankara’da Hacettepe Üniversitesi Beytepe Kampüs alanında ekolojik çevrede üretilen ekstraktlar kullanıldı. 0.5, 0.25, 0.125 ve 0.063 mg/ml konsantrasyonlarda 7 farklı PE SAOS-2 hücre dizinine eklenerek 2 gün boyunca inkübe edildi. Hücre çoğalması ve toksisitesi için MTT testi ile apoptotic hücre ölümünün belirlenmesi için TUNEL metodu ve kaspaz dağılımı için kaspaz 6, 8 ve 9 immunohistokimyası analizi kullanıldı. Hücreler MTT analizi sonrasında en büyük etki PE 7 için 0.125 mg/ml dilüsyonunda görüldü. TUNEL pozitif hücre sayısı en fazla olan PE 4 ve 5 için 0.125 mg/ml dilüsyonu oldu. Kaspaz 6 immünoreaktivitesi kaspaz 8 ve 9’dan daha güçlü idi. Daha da önemlisi kaspaz 6 boyaması PE 7 için 0.125 mg/ml dilüsyonunda çok daha iyi idi. Sonuç olarak, PE ile indüklenen apoptosis mekanizmasının antikansorejenik etkisinden dolayı kaspaz yolağı ile oluşabilir. PE kullanımı kanser tedavi protokolünde yararlı olabilir