Tipagem de papilomavírus humanos em amostras cervicais de pacientes coinfectadas pelo vírus da imunodeficiência humana

Contém ilustrações e tabelasOs papilomavírus humanos (HPV) mucosotrópicos são potenciais agentes de possível lesões pré-malignas e malignas. O vírus da imunodeficiência humana (HIV), por diminuir a imunidade do hospedeiro, é um dos co-fatores que facilitam o desenvolvimento destas lesões. Um dos objetivos deste trabalho foi estabelecer a técnica de polimorfismo dos fragmentos obtidos por enzimas de restrição (RFLP) para detecção de genótipos de HPV em amostras cervicais de citologia de 140 pacientes infectadas por HIV atendidas no Serviço de Colposcopia do Hospital dos Servidores do Estado (HSE), Rio de Janeiro, no período de 2003 a 2005. A detecção e a tipificação de HPV foi realizada pela técnica de reação em cadeia pela polimerase, utilizando-se os oligonucleotídeos iniciadores My09/11, associada à técnica de polimorfismo dos fragmentos obtidos por enzimas de restrição (PCR-RFLP). Os produtos resultantes da amplificação por PCR, foram clivados por seis enzimas de restrição BamHI, DdeI, HaeIII, HinfI, PstI, RsaI. Os fragmentos gerados pela clivagem foram submetidos à eletroforese em gel de agarose 1,5%, corados com brometo de etídeo e visualizados sob luz U.V. Do total de 140 amostras, 83 (60,0%) foram positivas para o HPV. Vinte e quatro tipos diferentes de HPV foram detectados, com prevalência dos tipos de alto risco HPV 16 (16,4%), HPV 58 (7,5%) e HPV 53 (6,8%). A infecção por tipos oncogênicos de HPV apresentou uma associação significativa entre mulheres jovens (≤30 anos) (p=0,02), de etnia branca (p=0,004), com maior número de parceiros sexuais (p=0,06), com mais de um filho (p=0,06) e cujo diagnóstico para HIV foi conhecido há menos de quatro anos (p=0,001). A infecção por tipos de baixo risco foi associada a início da atividade sexual precoce (p=0,06). Genótipos oncogênicos ou não oncogênicos foram associados significativamente a alterações citológicas (p<0,001 e p=0,004, respectivamente). As pacientes que tinham contagem de células CD4 abaixo de 200/mm3 e 350/mm3 apresentaram maior probabilidade de desenvolver lesão cervical (p=0,009 e p=0,017, respectivamente) e de estarem infectadas por tipos de alto potencial oncogênico (p=0,025 e p=0,043, respectivamente). Concluímos que a implantação da técnica de PCR-RFLP permitiu a detecção de um grande número de genótipos distintos de HPV, como esperado em uma população HIV positiva. Considerando que nesta população, regularmente submetida a exames ginecológicos, foi encontrado um alto índice de lesões cervicais de alto grau, mas nenhum caso de câncer, ressaltamos a importância dos exames preventivos no controle desta doença.Human papillomaviruses (HPV) are potential agents of pre-malignant and malignant lesions in the cervical mucosa. Human immunodeficiency virus (HIV) is able to decrease host immunity acting as a co-factor in the development of these cervical lesions. The present work aimed to establish the restriction fragment length polymorphism technique for the detection of HPV types in cervical samples from 140 HIV soropositive women attending the Cervical Pathology Service of Hospital dos Servidores de Estado (HSE), Rio de Janeiro, from 2003 to 2005. The HPV detection and typing was carried out by polymerase chain reaction (PCR), using My09/11 generic primers followed by restriction fragment length polymorphism method (PCR-RFLP). The PCR products were digested by six restriction enzymes (BamHI, DdeI, HaeIII, HinfI, PstI, RsaI) and the fragments were analyzed in 1,5% agarose gels stained by ethidium bromide and visualized on U.V. light. From the 140 studied samples, 83 (60,0%) were HPV positive. Twenty four different HPV genotypes were detected. Among them, the most prevalent were the high risk HPV types HPV 16 (16,4%), 58 (7,5%) and 53 (6,8%). The oncogenic HPV types infection were significantly associated with young female patients (≤30 years) (p=0,02), white ethnicity (p=0,004), high number of sexual partners (p=0,06), more one parities (p=0,06) and recent HIV diagnosis (less than 4 years) (p=0,001). The low-risk HPV types infection were associated with early first sexual intercourse (p=0,06). Both oncogenic and non oncogenic genotypes were associated with abnormal cytology (p