Caracterização imunológica de antígenos de Strongyloides stercoralis

The strongyloidiasis is caused by the intestinal nematode Strongyloides stercoralis, being prevalent in 3-13% infected patients in Brazil, and it typically occurs in the asymptomatic form. However, this nematode is considered of great importance for developing hyperinfection and dissemination in immunosupressed patients especially under corticoid therapy. The definitive diagnosis is normally done by detection of larvae on fecal samples; however, as the parasite load is often low in most cases and the larvae shedding is reduced and irregular, the diagnosis becomes extremely difficult. Thus, developing reliable serological methods for the diagnosis of strongyloidiasis becomes imperative. The objective of this study was to immunologically characterize epitopes of S. stercoralis larvae by analysis of its reactivity to serum samples of individuals with and without the disease. The search for S. stercoralis larvae on fecal samples by using the Rugai and Coprotest techniques was done with two objectives: to compare the sensibility of the two techniques, define the individuals positive and negative for strongyloidiasis, and to obtain filarioid larvae for the making of somatic antigen. The Western-blot technique was applied for the immunologic characterization of 101 serum samples that were divided into 6 groups: (G1) patients only positive for S. stercoralis by fecal exam, (G2) adults negative for any parasites by fecal exam (N=10), (G3) serum from umbilical cord (N=10), (G4) patients negative for any parasites by fecal exam from an area with high prevalence of strongyloidiasis (N=10), (G5) individuals with other helminth infection (N= 44), and (G6) individuals treated for strongyloidiasis (N=4). The results showed that strongyloidiasis was more prevalent in the Encanto community (6,4%) when compared to the Soledade community (2,7%). Additionally, a considerable fluctuation of larvae shedding was observed in these patients. In all the studied serum groups different reactivity profiles were observed, and the recognition of proteins with molecular mass varied from 6 to 129kDa. A protein band of approximately 26kDa presented a high frequency of reactivity (18/23) on the G1. The same band was also found in one serum from G3, 6 serum samples from G5 [hookworms (2/10), Ascaris lumbricoides (3/10) and Taenia sp. (2/10)] and one serum sample from G6. Two other reactive bands, one of approximately 33kDa and a duplet of approximately 21kDa, also have high frequency, 17/23 and 9/23, respectively. However, these two bands were also observed in all the other studied serum groups. Thus, we can suggest that the 26kDa band could be an important tool for the development of a diagnostic technique for strongyloidiasisA estrongiloidíase é causada pelo nematóide intestinal Strongyloides stercoralis, e apresenta prevalência de 3 a 13% no Brasil, ocorrendo de forma assintomática na maior parte dos indivíduos infectados. Entretanto, é considerado de grande importância por causar hiperinfecção e disseminação em pacientes imunodeprimidos, principalmente sob o uso de corticóides. O diagnóstico definitivo normalmente é feito medinte a detecção de larvas nas fezes; mas como a quantidade de parasitos é baixa na maioria dos casos e a eliminação de larvas é reduzida e irregular, esta se torna extremamente difícil. Sendo assim, o desenvolvimento de testes sorológicos confiáveis para o diagnóstico da estrongiloidíase parece ser uma alternativa necessária. Desta forma, objetivou-se neste trabalho caracterizar imunologicamente epítopos de larvas de S. stercoralis por meio da análise de sua reatividade frente a amostras de soro de indivíduos com e sem a infecção pelo agente. A pesquisa de larvas de S. stercoralis foi realizada em amostras de fezes com as técnicas de Rugai e Coprotest objetivando-se comparar a sensibilidade das técnicas, selecionar indivíduos positivos e negativos para a estrongiloidíase, e obter larvas filarióides para confecção de antígeno somático. Para a caracterização imunológica por meio da técnica Western-blot, foram utilizados 101 soros, divididos em 6 grupos: (G1) pacientes somente positivos para S. stercoralis no exame parasitológico de fezes (EPF) (N=23), (G2) adultos comprovadamente negativos para qualquer parasitose pelo EPF (N=10), (G3) soros de cordão umbilical (N=10), (G4) pacientes negativos para qualquer parasitose pelo EPF provenientes de área com alta prevalência de estrongiloidíase (N=10), (G5) indivíduos portadores de outras helmintíases (N= 44), e (G6) indivíduos tratados para estrongiloidíase (N=4). A prevalência da estrongiloidíase foi mais elevada na comunidade do Encanto(6,4%) do que na de Soledade (3,36%). Além disso, foi observada uma considerável flutuação na eliminação de larvas por estes pacientes. Nos grupos de soro testados, foram encontrados perfis variados de reatividade, com o reconhecimento de proteínas com massas moleculares que variavam de 6 e 129kDa. No G1, uma banda proteica de aproximadamente 26kDa apresentou uma alta freqüência de reatividade (18/23). Esta mesma banda também foi encontrada em um soro do grupo 3, 6 soros do grupo 5 [Ancilostomídeos (2/10), Ascaris lumbricoides (3/10) e Taenia sp. (2/10)] e um soro do grupo 6. Duas outras bandas reativas, uma de aproximadamente 33kDa e um duplex de aproximadamente 21kDa, também apresentaram freqüências elevadas de respectivamente 17/23 e 9/23. Porém estas duas bandas também foram encontradas em todos os outros grupos estudados. Desta forma, podemos sugerir que a banda de 26KDa possa ser uma ferramenta importante no desenvolvimento de técnica diagnóstica para a estrongiloidías