Efeitos do consumo de queijo minas enriquecido com probiótico Lactobacillus Acidophilus LA-05 nos parâmetros renais, de estresse oxidativo e na expressão proteica de TLR4 no tecido renal em modelo experimental de doença renal crônica.

Introdução: A doença renal crônica (DRC) e seu desenvolvimento são intimamente relacionados à disbiose intestinal, ao estresse oxidativo e à inflamação. O uso de probióticos é apontado como possível estratégia para amenizar os danos e retardar a progressão da DRC, pela melhora da disbiose intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito do consumo de queijo minas enriquecido com probiótico (Lactobacillus acidophilus LA-05), no estresse oxidativo e na inflamação em modelo experimental de DRC. Métodos: Ratos Wistar machos, 220-250g, foram divididos em 3 grupos: Controle (CT, n=7), Nx (n=14) e Sham (n=14). Para estabelecer a DRC (Nx), os animais foram submetidos a técnica de nefrectomia 5/6 de duas etapas. Os animais do grupo Sham sofreram estresse cirúrgico sem alterações renais. Após 4 semanas, os grupos Nx e Sham foram subdivididos (n=7/grupo): NxQ (DRC + queijo convencional); NxQP (DRC + queijo probiótico); ShamQ (sem alteração renal + queijo convencional); ShamQP (sem alteração renal + queijo probiótico). Cada animal alocado aos grupos queijos recebeu 20g do respectivo queijo, ração e água ad libtum. Ao queijo probiótico foi adicionado 10⁹ UFC/dia de Lactobacillus Acidophilus La-05. Após 6 semanas os animais foram eutanasiados. Foram determinadas as concentrações séricas de creatinina, ureia, ácido úrico, albumina, cálcio, fósforo e perfil lipídico (Kit Bioclin®). Além da concentração plasmática de lipopolissacarídeos (LPS) analisada por ensaio imunoenzimático (ELISA). Espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) (Ohkawa) e a atividade da superóxido dismutase (SOD) e da glutationa peroxidase (GPx) (Kit Cayman®) foram mensurados no plasma e no tecido renal. A expressão proteíca do receptor toll-like 4 (TLR4) foi analisada no tecido renal (Western Blotting). Foi realizada análise histológica do tecido renal remanescente. As análises estatísticas foram realizadas pelo GraphPad Prism 8, considerando nível de significância de p<0,05. Resultados: Não foram observados efeitos significativos nas concentrações de ureia, creatinina, fósforo e albumina entre os grupos. Houve aumento significativo das concentrações de ácido úrico no grupo NxQP comparado ao grupo NxQ (11,16±2,046 e 8,04±0,8178 mg/dL, p=0,0020) e CT (11,16±2,046 e 7,783±0,6327 mg/dL, p=0,0008). Assim como na concentração de cálcio entre NxQP e NxQ (10,25±0,3834 e 9,133±0,4633 mg/dL, p=0,0007). Em relação ao estresse oxidativo e atividade antioxidante, houve efeito poupador da atividade da SOD no grupo NxQP comparado ao grupo NxQ (485,4±27,4 U/mL e 635,6±37,14 U/mL, p<0,0001, respectivamente). Não foram observadas diferenças significativas na atividade de GPx e nos níveis de TBARS no sangue e no tecido renal entre os grupos. Também não foram observadas alterações significativas nos níveis de LPS e na expressão proteica de TLR4. Na análise histopatológica observou-se túbulos renais dilatados com aumento significativo do diâmetro glomerular no grupo NxQ comparado ao CT (100,0±9,126 e 84,10±2,679 µm, p<0,0001) e ShamQ (100,0±9,126 e 83,72100,0±9,126 e 3,751 µm, p<0,0001). Conclusão: O consumo do queijo enriquecido com Lactobacillus Acidophilus La-05 em um modelo experimental de DRC demostrarou um impacto no aumento dos níveis séricos de cálcio. E sobretudo destacou a hipótese de um efeito poupador na atividade plasmática da enzima antioxidante SOD.Background: The development of chronic kidney disease (CKD) is closely related to intestinal dysbiosis, oxidative stress and inflammation. The use of probiotics has been pointed out as a good strategy to promote intestinal modulation, mitigate damages and delay the progression of the CKD. Objective: To evaluate the effect of probiotic-enriched (Lactobacillus acidophilus LA-05) Minas cheese consumption on oxidative stress and inflammation in an experimental model of CKD. Methods: Male Wistar rats, 220-250g, were divided into 3 groups: Control (CT, n=7), Nx (n=14) and Sham (n=14). To establish the CKD (Nx), the animals underwent to a two-step 5/6 nephrectomy. The animals in the Sham group suffered the same surgical stress without renal changes. After 4 weeks, the Nx and Sham groups were subdivided (n=7/group): NxC (CKD + conventional cheese); NxPC (DRC + probiotic cheese); ShamC (no renal change + conventional cheese); ShamPC (no kidney change + probiotic cheese). Each animal allocated in cheese’s groups received 20g of the respective cheese, food and water ad libtum. 10⁹ CFU/day of Lactobacillus Acidophilus La-05 was added to the probiotic cheese. After 6 weeks the animals were euthanized. Serum concentrations of creatinine, urea, uric acid, albumin, calcium, phosphorus, lipid profile (Bioclin® kit) and plasma lipopolysaccharides (LPS) (ELISA) were determined. Thiobarbituric acid reactive species (TBARS) (Ohkawa) and superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) (Cayman® kit) activity were measured in plasma and kidney tissue. Toll-like receptor 4 (TLR4) protein expression was analyzed in renal tissue (Western Blotting). Histological analysis of the remaining renal tissue was performed. Statistical analyzes were performed using the GraphPad Prism 8, considering a significance level of p<0.05. Results: No significant effects were observed on urea, creatinine, phosphorus and albumin concentrations between groups. There was a significant increase in uric acid concentrations in the NxPC group compared to the NxC group (11.16±2.046 vs. 8.04±0.8178 mg/dL, p=0.0020) and CT (11.16±2.046 vs 7.783± 0.6327 mg/dL, p=0.0008). As well as the calcium concentration between NxPC and NxC (10.25±0.3834 vs 9.133±0.4633 mg/dL, p=0.0007). Regarding oxidative stress and antioxidant activity, there was a sparing effect of SOD activity in the NxQP group compared to the NxQ group (485.4±27.4 U/mL vs 635.6±37.14 U/mL, p<0.0001, respectively). No significant differences were observed in GPx activity and TBARS levels in blood and kidney tissue between the groups. There were also no significant changes in LPS levels and TLR4 protein expression. In the histopathological analysis, it was possible to observe dilated renal tubules with a significant increase in the glomerular cross-section area in the NxC group compared to the CT group (100.0±9.126 vs 84.10±2.679 µm, p<0.0001) and ShamC (83.72100.0±9.126 vs 3.751 µm, p