Avaliação das atividades biológicas e terapêutica de extratos de plantas da Equisetum hyemale, selecionada por etnobotânica, no carcinoma de células escamosas de boca

O carcinoma de células escamosas de boca (CCEB) se destaca como um roblema de saúde pública no Brasil, isso devido sua alta incidência e baixa taxa de sobrevida, mesmo com os avanços de diagnósticos e tratamentos, o desenvolvimento de novas terapias tornam-se necessário. Plantas do gênero Equisetum são popularmente utilizadas no tratamento de diversas doenças entre elas o câncer. Já foi demonstrado o efeito citotóxico de plantas do gênero em células tumorais, mas pouco se sabe o efeito da espécie Equisetum hyemale no tratamento de CCEB. Foi então preparado o extrato da espécie e então realizado uma serie de experimentos in vitro com linhagens de CCEB (SCC9, SCC4 e SCC25) e células normais, ensaios in vivo em camundongos (Mus musculus) e uma análise para identificar os componentes majoritários do extrato. Nos ensaios de MTT com o extrato bruto foram calculados o IC50 em SCC9 de 101,2 ± 0,04 μg/mL, carboplatina 58,7±0,03 μg/mL e em fibroblasto de 1475 ± 0,40 μg/mL e 358 ± 0,047 μg/mL para o extrato bruto e carboplatina, respectivamente. Obtendo um índice de seletividade de 14,56 para o extrato e 6,72 para a carboplatina. Devido aos resultados promissores com o extrato etanólico, foram realizados os ensaios de viabilidade celular com as partições e foi calculado o IC50 para cada uma delas, nas células SCC9, SCC4, SCC25 e fibroblasto sendo a partição de acetato de etila(EHSa) IC50=30,23±0,05 μg/mL(SCC9), 19,17±0,06 μg/mL (SCC4), 36,71±0,06 μg/mL (SCC25), 447± 0,01 μg/mL (fibroblasto) e hexâno(EHSh) IC50= 123,1± 0,04 μg/mL (SCC9), 452,7 ± 0,17 μg/mL ( SCC4), 185,8 ± 0,85 μg/mL (SCC25), 347.2 ± 0,55 μg/mL ( fibroblasto) e a de diclorometano(EHSd) não alcançou 50% de inibição nas concentrações testadas. A fração mais seletiva foi a EHSa com um índice de seletividade médio de 15,59. Na análise morfológica foi observado blebling de membrana e retração celular. E nas marcações de fluorescência a fração EHSa marcou caspase 3/7 ativas, foi positivo para I.P e foi observado núcleos picnóticos através da marcação por Hoechst. A fração não demonstrou atividade hemolítica. No ensaio de toxicidade aguda não apresentou toxicidade no pulmão e baço. No rim causou reação contra o extrato, mas não se observou dano renal e no fígado causou degeneração vacuolar moderada e binucleação celular além de uma hiperemia portal moderada, mas não se observou pontos de necrose. Na composição fitoquímica foram identificados componentes já descritos como flavonoides diglicosilados, flavonoides não glicosilados, derivados do ácido cinâmico e foram identificadas 6 novas substâncias nunca descritas nesta espécie: 5-hidroxi-3',4',7,8-tetrametoxiflavonam (14), 5,4´-diidroxi-7,8,3´-trimetoxiflavona (15), 5,7-dihidroxi-3',4'-dimetoxiflavona (16), 3',4',5,7-tetrametoxiflavona (17), 5-hidroxi-3',4',7-trimetoxiflavona (18), 5,4´-diidroxi-3´-7´-dimetoxiflavona (19). Além disso, foi identificado diversas substâncias com atividade antiproliferativa de linhagens tumorais nas 3 frações, como os glicosídeos de kaempferol. O extrato de E. hyemale inibiu a viabilidade de linhagens de CCEB de maneira seletiva através de morte por apoptose. A fração EHSa possui baixa toxicidade in vivo e foram identificadas 6 substâncias nunca descritas na espécie E. hyemale entre elas a 16 e 18 já possuem atividade antiproliferativa em células tumorais descritas.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorSquamous cell carcinoma of the mouth (SCC) stands out as a public health problem in Brazil, due to its high incidence and low survival rate, even with advances in diagnosis and treatments, the development of new therapies becomes necessary . Plants of the Equisetum genus are popularly used in the treatment of several diseases, including cancer. The cytotoxic effect of plants of the genus on tumor cells has already been demonstrated, but little is known about the effect of the species Equisetum hyemale in the treatment of CCEB. The extract of the species was then prepared and then carried out a series of in vitro experiments with CCEB strains (SCC9, SCC4 and SCC25) and normal cells, in vivo assays in mice (Mus musculus) and an analysis to identify the major components of the extract. In the MTT assays with the crude extract, the IC50 in SCC9 of 101.2 ± 0.04 μg/mL, carboplatin 58.7 ± 0.03 μg/mL and in fibroblast of 1475 ± 0.40 μg/mL and 358 ± 0.047 μg/mL for the crude extract and carboplatin, respectively. Obtaining a selectivity index of 14.56 for the extract and 6.72 for carboplatin. Due to the promising results with the ethanol extract, cell viability assays were performed with the partitions and the IC50 was calculated for each of them, in the SCC9, SCC4, SCC25 and fibroblast cells, with the partition of ethyl acetate (EHSa) IC50= 30.23 ± 0.05 μg/mL (SCC9), 19.17 ± 0.06 μg/mL (SCC4), 36.71 ± 0.06 μg/mL (SCC25), 447 ± 0.01 μg/mL (fibroblast) and hexane (EHSh) IC50 = 123.1 ± 0.04 μg/mL (SCC9), 452.7 ± 0.17 μg/mL (SCC4), 185.8 ± 0.85 μg/mL (SCC25 ), 347.2 ± 0.55 μg/mL (fibroblast) and the dichloromethane (EHSd) did not reach 50% inhibition at the concentrations tested. The most selective fraction was EHSa with an average selectivity index of 15.59. In the morphological analysis, membrane blebling and cell retraction were observed. And in the fluorescence labels, the EHSa fraction labeled active caspase 3/7, was positive for I.P and pyknotic nuclei were observed through the labeling by Hoechst. The fraction did not show hemolytic activity. In the acute toxicity trial it did not show toxicity in the lung and spleen. In the kidney it caused a reaction against the extract, but no renal damage was observed and in the liver it caused moderate vacuolar degeneration and cellular binucleation in addition to a moderate portal hyperemia, but no necrotic spots were observed. In the phytochemical composition, components already described as diglycosylated flavonoids, non-glycosylated flavonoids, cinnamic acid derivatives were identified and 6 new substances never described in this species were identified: 5-hydroxy-3',4',7,8-tetramethoxyflavonam (14), 5,4'-dihydroxy-7,8,3'-trimethoxyflavone (15), 5,7-dihydroxy-3',4'-dimethoxyflavone (16), 3',4',5,7-tetramethoxyflavone (17), 5-hydroxy-3',4',7-trimethoxyflavone (18), 5,4'-dihydroxy-3'-7'-dimethoxyflavone (19). Furthermore, several substances with antiproliferative activity of tumor lines in the 3 fractions were identified, such as kaempferol glycosides. The E. hyemale extract selectively inhibited the viability of CCEB strains through death by apoptosis. The EHSa fraction has low in vivo toxicity and 6 substances never described in the E. hyemale species were identified, among them 16 and 18 already have antiproliferative activity in described tumor cells.95 p