Avaliação da influência do microquimerismo feto-maternal na miocardite autoimune experimental murina

Introdução: No decorrer da gravidez ocorre um trânsito bidirecional de células de diversas linhagens, que podem ser detectadas varias décadas após a gestação no sangue e nos tecidos de indivíduos saudáveis. A passagem de células fetais para o organismo materno consiste no chamado microquimerismo fetal, o qual não tem seu papel totalmente esclarecido. A miocardite pode ser definida como a inflamação do miocárdio com consequente injúria tecidual. As suas causas variam desde efeitos citotóxicos de agentes infecciosos, resposta imunológica à infecção e/ou da ação de linfócitos autoreativos. Um dos modelos utilizados para estudar a miocardite consiste na imunização de linhagens susceptíveis de camundongos com miosina ou peptídeo cadeia alfa de miosina. Objetivo: Investigar a presença e influência de células de origem fetal no tecido cardíaco, de camundongos primíparas e multíparas de acasalamentos singenêicos e alogenêicos, submetidas a miocardite autoimune experimental. Material e Métodos: Camundongos fêmeas BALB/c foram acasaladas com machos BALB/c (acasalamento singenêico), C57BL/6 ou C57BL/10 GFP+ (acasalamento alogenêico). Foram formados dois blocos de experimento, o primeiro constituídos por fêmeas primíparas e o outro por fêmeas multíparas. Como controle foi utilizado fêmeas BALB/c nulíparas. As fêmeas foram imunizadas com 100μg do peptídeo cadeia alfa de miosina (MyHC-α614–629) associada ao adjuvante de Freund completo. Após quatorze, vinte e um, trinta e cinco dias após a imunização, foi mensurado peso, batimentos cardíacos, saturação de oxigênio e obtida amostra de sangue para determinação de anticorpos específicos anti-MyHC-α614–629. Os animais foram eutanaziados, coração e baço foram excisados para determinação dos índices cardíaco e esplênico. Fragmentos de coração foram dissociados e as células obtidas marcadas com anticorpo anti-H-2Kb e anti-Sca-1 para avaliação da presença de células fetais e de precursores da linhagem hematopoiética. Também foi realizada análise histopatológica para a caracterização e mensuração do infiltrado inflamatório. Resultados: Fêmeas nulíparas demonstraram intenso infiltrado inflamatório mononuclear, associado a fibroplasia, que se estendia do epicárdio até o miocárdio, e em alguns casos encontrava-se também no endocárdio. Focos de calcificação distrófica também foram observados. Já fêmeas primíparas apresentaram uma reação inflamatória menos intensa. Estes animais também apresentaram elevação da porcentagem de células Sca-1+ no coração. Todos os grupos demonstraram elevação dos índices esplênicos e da produção de anticorpos IgG anti-MyHC-α614–629, sendo que fêmeas de acasalamento singeneico apresentaram títulos de anticorpos menores que outros grupos. Fêmeas primíparas apresentaram um aumento da relação de linfócitos TCD4/CD8 em relação às nulíparas. Animais de acasalamento alogeneico apresentaram um aumento da porcentagem de células fetais em tecido cardíaco após a imunização. Não houve alterações na análise de sobrevida dos animais deste grupo. Na fase mais tardia do processo inflamatório estes animais demonstraram focos de fibrose, que foram mais intensos em fêmeas nulíparas. Fêmeas multíparas, também apresentaram um aumento do índice esplênico e dos níveis séricos de anticorpo IgG anti-MyHC-α614–629, entretanto a análise histopatológica deste grupo demonstrou somente um discreto infiltrado inflamatório mononuclear abaixo do pericárdio visceral nas fêmeas imunizadas. A expressão de Sca-1 apresentava-se elevada nas fêmeas acasaladas.Conclusão: Fêmeas de camundongos, após a parição, mantêm células de origem fetal que podem ser encontradas no tecido cardíaco, após a imunização com peptídeo da cadeia alfa de miosina. A reação inflamatória no coração é mais intensa nas fêmeas nulíparas. O conjunto de nossos resultados são sugestivos que a presença de células fetais contribui para uma resposta inflamatória menos intensa na miocardite experimentalIntroduction: During pregnancy there is a bidirectional transit of hematopoietic cells, that can be detected after several decades after pregnancy in blood and tissues of healthy individuals. The passage of fetal cells to the mother's body is called fetal microchimerism, which role has not been fully clarified. The myocarditis can be defined as an inflammation of the myocardium with consequent tissue injury. Its causes range from the cytotoxic effects of infectious agents, the immune response to infection and/or the action of autoreactive lymphocytes. One of the models used to study a myocarditis in the immunization of susceptible strains of mice with myosin or myosin alpha chain peptide. Aim: Investigate the presence and influence of cells of fetal origin in the cardiac tissue of uniparous and multiparous mice submitted to syngeneic and allogeneic mattings, and then subjected to experimental autoimmune myocarditis. Materials and methods: Female BALB / c mice were mated with BALB / c males (syngeneic mating) or C57Bl/ 6 or C57Bl/10 GFP+ (allogeneic mating) males. Two experimental blocks were formed: the first consisting of primiparous females and the other by multiparous females. As control, a group composed of BALB/c nulliparous females of the same age group was used. The mice were immunized with 100 μg of peptide MyHC-α614-629 associated with the complete Freund's adjuvant. After fourteen, twenty-one, thirty-five days after an immunization, weight, heart rate, oxygen saturation was measured. Blood sample were obtaines de tedermine specific anti-MyHC-α614-629 antibodies. The animals were euthanized with overdosage of anesthetic, heart and spleen were excised for the determination of the cardiac and splenic indexes. Heart fragments were then dissociated and the cells labeled with anti-H-2Kb and anti-Sca-1 antibody to evaluate the presence of fetal cells and precursors of the hematopoietic lineage. Histopathological analysis was also performed for a characterization and measurement of the inflammatory infiltrate. Results: Histopathological analysis of nulliparous females demonstrated intense mononuclear inflammatory infiltrate, associated with fibroplasia, that extended from the epicardium to the myocardium, and in some cases was also found in the endocardium. Dystrophic calcification foci were also observed. In contrast, primiparous females presented a less intense inflammatory reaction. These animals also showed an increase in the percentage of Sca-1 + cells in the heart. All groups demonstrated elevation of splenic indices and production of IgG anti-MyHC-α614-629 antibodies. Nulliparous females of this group did not show alterations in the number of lymphocytic types in the spleen in relation to the mated ones. Animals submitted to allogeneic matting show an increase in the percentage of fetal cells in cardiac tissue after immunization. There were no changes in the survival rates of the animals of this group. At the later stage of the inflammatory process, these animals demonstrated foci of fibrosis, which were more intense in nulliparous females. Multiparous females also showed an increase in splenic index and serum levels of anti-MyHC-α614-629 IgG antibody, however the histopathological analysis of this group demonstrated only a discrete mononuclear inflammatory infiltrate below the visceral pericardium in immunized females. The expression of Sca-1 was high in mated females. Conclusions: Female mice, after parturition, maintain in their organism cells of fetal origin that can be found in cardiac tissue after immunization with myosin alpha chain peptide. The inflammatory reaction in the heart is more intense in young nulliparous females than males of the same age group. Our results are suggestive that the presence of fetal cells in the maternal organism contributes to a less intense inflammatory response in experimental autoimmune myocarditis148f