Avaliação do perfil de ativação e exaustão de linfócitos T e sua correlação com o tratamento de pacientes pediátricos com leucemia linfoblástica aguda de células precursoras B

Introdução: A leucemia aguda (LA) é a neoplasia mais comum na infância, sendo a leucemia linfoblástica de células precursoras B (LLAcpB) a de maior incidência. O sistema imune é importante na eliminação dos clones leucêmicos, como demonstrado na literatura. Entretanto, os tumores exercem efeitos supressivos sobre o sistema imune, com a indução da expressão de moléculas imunossupressoras. Este processo induz a exaustão celular nos Linfócitos T, caracterizada pela expressão de moléculas inibitórias como CTLA-4 e PD-1 e pela perda da função efetora, podendo estar correlacionado com a resposta ao tratamento. Objetivo: Avaliar a associação entre os perfis de ativação e exaustão de Linfócitos T e a sua correlação com o tratamento dos pacientes com LLAcpB. Materiais e métodos: Foram avaliadas amostras de medula óssea de pacientes diagnosticados com LLAcpB, 28 amostras ao diagnóstico e 16 amostras coletadas posteriormente no dia 78 do tratamento, recebidas pelo Programa de Hematologia-Oncologia Pediátrico (PHOP) do Instituto Nacional de Câncer (INCA). Para análise da expressão de antígenos de membrana dos Linfócitos T, foi utilizado um painel de anticorpos monoclonais: CD4-FITC, CD8-PE, CD45RA PE-Cy7, CD279-PerCPCy5.5, CD3-APC e CD28 APC-H7. Adquirimos 1,000,000 de eventos em citômetro de fluxo FACSCanto II e os dados foram analisados no software Infinicyt. As análises estatísticas foram feitas no software GraphPad Prism e foram considerados significativos resultados com valor de p <0,05. Resultados: Observamos no D78 dos pacientes LLAcpB uma inversão na proporção de linfócitos T CD4+/CD8+ comparados aos controles e pacientes ao diagnóstico (p=0,01). Também no D78 encontramos uma diminuição das células T CD4+ Naive (p=0,04) em contraste a um aumento das Early Memory (p=0,01), além de um aumento na subpopulação Naive nos linfócitos T CD8+ (p=0,01). Em relação à expressão de PD-1, observamos a expressão de altos níveis nas células T CD4+ e CD8+ dos pacientes ao diagnóstico, o que se manteve no D78 (p=0,001). Concomitante a isso, vimos que pacientes que foram DRM+ durante o tratamento tinham maior expressão de PD-1 intermediário ao diagnóstico, comparados a pacientes DRM- (p=0,01) e que os pacientes com risco NCI alto apresentaram um maior percentual de células T expressando altos níveis de PD-1, quando comparados aos pacientes risco NCI padrão (p=0,04). Conclusão: Podemos concluir que há indícios que as alterações no sistema imunológico, em especial no perfil de exaustão de Linfócitos T estão associados com a resposta ao tratamento de pacientes pediátricos com LLAcpB.Introduction: Acute leukemia (AL) is the most common cancer in childhood, while B- cell precursor acute lymphoblastic leukemia (BCP-ALL) presents the highest incidence rate. The immune system is important in the elimination of leukemic cells as demonstrated in the literature. However, tumors have suppressive effects on the immune system, by inducing the expression of immunosuppressive molecules. This process induces cell exhaustion in T lymphocytes, characterized by the expression of inhibitory molecules such as CTLA-4 and PD-1 and the loss of effector function, which may be correlated with the response to treatment. Objective: Evaluate the association between T lymphocyte activation and exhaustion profiles and their correlation with BCP-ALL treatment. Methods: We have analyzed bone marrow samples from patients diagnosed with BCP-ALL, 28 samples at diagnosis, and 16 samples collected subsequently on day 78 of treatment. Such material was received by the Pediatric Hematology-Oncology Program of the National Cancer Institute. To analyze the expression of T lymphocyte membrane antigens, a panel of monoclonal antibodies was used: CD4-FITC, CD8-PE, CD45RA PE-Cy7, CD279 PerCPCy5.5, CD3-APC, and CD28 APC-H7. The acquisition of 1,000,000 events was performed in the flow cytometer FACSCanto II and the data analyzed using Infinicyt software. Statistical analyzes were performed using the GraphPad Prism software and results with p-value