Imágenes de microscopía de expansión de células ganglionares de retina de ratón

La conectividad en los circuitos ganglionares de la retina (RGC) es tan diversa como la morfología y función de las diferentes células ganglionares formando diferentes circuitos sinápticos. Los estudios de circuitos de las RGCs se beneficiarán de la aplicación de nuevas herramientas para la obtención de imágenes de super resolución con información de moléculas detectadas in situ. Las imágenes volumétricas de fluorescencia de super resolución por microscopía de expansión son una estrategia para la preparación de muestras biológicas que permiten descubrir estructuras diminutas al expandirlas con una red de polímeros. La idea es polimerizar esta red en muestras de tejido y luego expandir físicamente esta red con agua para agrandar las estructuras biológicas. Entre otras ventajas, la microscopía de expansión hace posible escanear esas diminutas estructuras utilizando métodos de microscopía estándar. Esta estrategia ha sido utilizada para el análisis nanométrico de las propiedades sinápticas en tejido nervioso. Nuestro enfoque experimental describe protocolos optimizados de microscopía de expansión para la detección tanto de las células ganglionares de la retina, como la de proteínas sinápticas por inmunohistoquímica. En este trabajo, describimos nuestro enfoque experimental para estudiar la conectividad sináptica de las células ganglionares de la retina del ratón combinando el marcaje celular de las células ganglionares, la detección de proteínas sinápticas por inmuno histoquímica y microscopía de expansión para lograr un aumento isotrópico de ~ 4x en la resolución espacial. Usando ratones TIGRE 2.0 dependiente de cre y ratones reporteros de desplazamiento de marco repetido de mononucleótido (MORF), promovemos expresión de una proteína fluorescente en estas células (Opn4Cre). Combinamos este marcaje celular con anticuerpos contra las proteínas presinápticas (vGAT) y postsinápticas (GlyR) para caracterizar la organización molecular de la inhibición de las células amacrinas sobre las células ganglionares de la retina ON alfa