Molecular Typing of Two Suspected Cutaneous Leishmaniasis Isolates in Baghdad

يعتبر داء الليشمانيات من الأمراض الطفيلية التي يسببها طفيلي الليشمانيا ، وهو مرض معدي متوطن في العراق. التشخيص بالطرق التقليدية غير دقيق وغير قادر على تشخيص طفيلي الليشمانيا على مستوى النوع. في هذه الدراسة تم التشخيص بطريقتين جزيئية بالتنميط الجزيئي للاطوار المسوطة لداء الليشمانيات الجلدي ، على مستوى النوع. الأول كان تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للبادئB6 والثاني ITS1-PCR متبوعًا بتعدد الأشكال المقيدة لطول الجزء باستخدام إنزيم التقييد HaeIII. تم استخلاص الحمض النووي من الاطوار المسوطة خارج الجسم الحي متبوعة بتضخيم kDNA والمنطقة ITS1 باستخدام زوج البادئ B6 و LITSR / L5.8S قبل هضم ناتج تضخيم تفاعل البلمرة ITS1 . نواتج تضخيم تفاعل البلمرة كانت bp359 و bp450 لـ B6 و ITS1 ، على التوالي. كشف ITS1-RFLP عن حزميتن متميزتين يتراوح حجمهما بين bp150 و,300 bp عل التوالي. أثبتت هذه النتائج أن العزلتين تعودان إلى داء الليشمانيا الجلدي ، تحديدا النوع الاستوائي. نوصي بالطريقتين الجزيئيتين للفحص المباشر للعينات المأخوذة من قرحة الجلد للمرضى الذين يشتبه في إصابتهم بداء الليشمانيات الجلدي للتشخيص الحساس والسريع لأكثر السلالات العراقية انتشارًا من داء الليشمانيات الجلدي وهي Leishmania tropica.Leishmaniasis is a group of parasitic diseases caused by Leishmania spp., an endemic infectious agent in developing countries, including Iraq. Diagnosis of cutaneous lesion by stained smears, serology or histopathology are inaccurate and unable to detect the species of Leishmania. Here, two molecular typing methods were examined to identify the promastigotes of suspected cutaneous leishmaniasis samples, on a species level. The first was species-specific B6-PCR and the second was ITS1-PCR followed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) using restriction enzyme HaeIII. DNA was extracted from in vitro promastigote culture followed by amplification of kDNA by B6 or amplification and digestion of LITSR/L5.8S. PCR produced bands of ~359 bp and ~450 bp for B6 and ITS1, respectively. Digestion of ITS1 by RFLP revealed two distinct bands of ~150 bp and ~300 bp size. The results reviled that the two isolates belong to cutaneous Leishmaniasis, specifically Leishmania tropica. In conclusion, the confirmation of the studied methods will improve rapid and accurate diagnosis of Leishmania species of the most prevalent Iraqi strain of cutaneous leishmaniasis, L. tropica