Kinetic Studies of Na+/K+-ATPase in Tissue Aerobic Thyroid Patients

انزيم صوديوم/بوتاسيوم اتبيز Na+/ K+-ATPase   عبارة عن بروتين يعمل على تنظيم تدرجات الصوديزم  Na+ والبوتاسيوم K+ عبر غشاء الخلية من خلال ضخ  ثلاث أيونات صوديوم إلى الخارج وأيونين بوتاسيوم إلى داخل الخلية ، تهدف الدراسة إلى تقديم رؤيا ميكانيكية مفصلة للانزيم  يحتمل أن تكون لها آثار مهمة على التنظيم الفسيولوجي للنقل الفعال لايوني Na+  و K+   في نسيج مرضى الغدة الدرقية الهوائية . تم الحصول على عينة النسيج الدرقي من مرضى  بعمر35 سنةحيثوأجريت العملية في مستشفى الهادي التخصصي الأهلي- سامراء تم حفظ العينات بدرجة( -20ºC) لحين الأستعمال. تم عزل وتنقية الأنزيم بواسطة  الترسيب الملحي , التبادل الأيوني ,والترشيح الهلامي والترحيل الكهربائي . استخدمت تقنية مطيافية المرئية  لتقدير فعالية الأنزيم .كذلك شملت  الدراسة تعيين الخواص الحركية للأنزيم .تم الحصول على متناظرين (I , II) وتم التأكد من نقاوة الفصل بواسطة الترحيل الهلامي على هلام الاكريل امايد (SDS-PAGE) حيث ظهرت حزمتين . بينت النتائج الحركية ان  التركيز الأمثل للمادة الأساس (1.5mM) وبلغت قيم ثابت Km  عند (1.973mM) أما قيمةVmaxفقد بلغت (5.95Mm.L-1.min-1) أما درجة الحرارة المثلى فقد كانت عند (37°C) , الدالة الحامضية  المثلى عند 7.4 , ولوحظ اقصى فعالية للأنزيم عند زمن(5 min) . أن انزيم Na+/ K+-ATPase المنقى من نسيج الغدة الدرقية الهوائية  له خصائص حركية محددة تعكس اهمية التنظيم الداخلي للانزيم والتي تعطي الخلية قابليتها التنظيمية الدقيقة التي تتفق مع الملامح الفسيولوجية لنسيج الغدة الهوائية.Na+/K+-ATPase is a prevalent enzyme that maintains the Na+ and K+ gradients across the cell membrane by transporting three Na+ out and two K+ into the cell, the aim of this study  is to provide detailed mechanistic insights, potentially with important effects on physiological regulation of active Na and K transport in tissues of Aerobic Thyroid Patient. Thyroid tissues were obtained from a 35 year old patients, the operation was carried out at the Al-Hadi Specialist Hospital in Samarra city, the sample was stored at -20ºC until used. The purification protocol included Salt Precipitation, Ion Exchange Chromatography, Gel Filtration and Electrophoresis, a spectrophotometric method was   used to determine the enzyme activity. kinetic parameters  was also  obtained  for the enzyme. Partial purification of Na+/K+-ATPase revealed two isoenzymes (I ,II). The purity of separated isoenzymes were proved by SDS-PAGE electrophoresis. The kinetic characteristics of Na+/K+-ATPase showed that optimum substrate concentration about 1.5mM,  Km 1.052mM,  and Vmax 6.062, optimum temperature was 37 ºC, optimum pH  7.4 and optimum  time  in 25 min. Na+/K+-ATPase purified from Thyroid tissue  has distinct kinetic characteristic that reflects the importance of      intracellular regulation of specific Na+/K+-ATPase pump which gives cells the ability to precisely coordinate to their physiological requirements .                                                                                            &nbsp