Sobre-expresión de receptores tipo AT1 y AT2 de angiotensina II en fibroblastos cardiacos adultos de rata : participación en el equilibrio sobrevida

Memoria para optar al título de Químico FarmacéuticoEstá reportado que Angiotensina II (Ang II) conduce a hiperplasia en fibroblastos cardiacos y apoptosis sobre cardiomiocitos “in vitro”, sin embargo, estas respuestas son aún materia de controversia, siendo el bajo número de receptores para este péptido en estos tipos celulares, una de las principales limitaciones para la obtención de resultados concluyentes. Mediante la sobre-expresión con adenovirus de receptores de Ang II del subtipo AT1 y AT2, evaluamos los efectos de Ang II sobre cultivos primarios de fibroblastos cardiacos adultos (FCA). Sorprendentemente, Ang II condujo a la pérdida de viabilidad en FCA transducidos con AdAT1R, por otro lado, la viabilidad de FCA transducidos que sobre-expresaron GFP ó AT2R no fue alterada por Ang II. La muerte celular mediada por AT1 presentó características tipo apoptosis tales como compactación celular, “blebbing”, activación de caspasa 3 y DNA laddering. Se demostró que la estimulación por Ang II produce en estas células un rápido aumento en la concentración de calcio intracelular, y paralelamente la activación de la vía ERK aunque con distinta temporalidad. Interesantemente, solo se observó apoptosis de los FCA transducidos con AdAT1R y estimulados con Ang II en presencia de calcio externo. Por contraparte, la activación de ERK en ausencia de calcio en el medio de incubación, condujo a una mejora en la viabilidad celular. Por tanto, se concluye que en FCA transducidos AdAT1R, la Ang II activa un patrón de señales intracelulares asociados tanto a muerte como a sobreviva, y que dependiendo de las condiciones de cultivo ausencia/presencia de calcio externo será la manifestación celular que primará.It is reported that Angiotensin II (Ang II) leads to hyperplasia in cardiac fibroblasts and apoptosis on cardiomyocytes "in vitro". Nevertheless, these answers are still controversy matter. Between the main argumentations for obtain definitive results, the low number of theses receptors for Ang II in these cells is a crucial step. By means of adenoviral transduction to over-express the receptors of Ang II subtype AT1 and AT2, we evaluated the Ang II effects on primary cultures of adult cardiac fibroblasts (ACF). Surprisingly, Ang II lead to the loss of viability in ACF transducted with AdAT1R, meanwhile, the viability of transducted ACF that over-expressed GFP or AT2 was not altered by Ang II. The cellular death mediated by AT1R displayed apoptotic characteristics such as cellular compaction, "blebbing", caspase-3 activation and DNA laddering. We demonstrated that Ang II stimulated in these cells cause a rapid intracellular calcium increase, and in a parallel manner the ERK pathway signaling activation, although with a distinct temporality. Interestingly, apoptosis was observed only in ACF transducted with AdAT1R in presence of external calcium in the medium culture. By contrast part, the activation of ERK in calcium absence in incubation medium, lead to an improvement in the cellular viability. Therefore, we conclude that ACF AdAT1R transducted, have capacity of answer to Ang II activating a pattern of signals associate to cellular death or survival, which will depend of presence or absence of calcium in the extracellular culture medi