Cryopreservation in fish sperm : review of experimental protocols and new perceptions

A criopreservação de espermatozoides tem sido alcançada com sucesso para muitas espécies aquáticas, especialmente em peixes. A utilização do leite em pó tem se mostrado uma alternativa interessante para criopreservação espermática, e seu uso tem apresentado bons resultados após o descongelamento para diversas espécies de peixe. O zebrafish é um modelo biológico popular para estudos de diversas áreas de pesquisa, apesentando particularidades satisfatórias, por isso se faz necessária a preservação das linhagens existentes. Essa tese teve como objetivo geral realizar um levantamento do histórico e do momento recente sobre a criopreservação de sêmen em diversas espécies de peixes, bem como conceituar uma avaliação crítica das limitações, possíveis tendências e caminhos a serem seguidos nesta área, além de realizar a análise do espermatozoide de zebrafish em contato com diferentes crioprotetores e tempos de equilíbrio, tomando como ferramenta de estudo as relações estruturais, morfológicas e de integridade de membrana do espermatozoide. Com os resultados obtidos no primeiro estudo, foi possível obter informações detalhadas sobre protocolos de criopreservação, taxas de resfriamento e métodos de descongelamento, dispositivos utilizados, bem como a associação do leite em pó com outros crioprotetores, além de conceituar uma avaliação crítica das limitações, possíveis tendências e caminhos a serem seguidos na área da criopreservação. A partir das respostas obtidas foi possível observar que a inclusão do leite em pó na crioproteção de espermatozoides trouxe respostas positivas, apresentando ganhos satisfatórios principalmente para espécies pertencentes à ordem Siluriformes e Cypriniformes. No segundo estudo, pôde-se observar que o tratamento com concentração de 10% de metanol e 5 minutos de equilíbrio foi o mais indicado, apresentado melhores resultados para a realização do processo de criopreservação espermática. A avaliação da relação de simultaneidade entre os fatores crioprotetor, concentração do crioprotetor e tempo de equilíbrio ao crioprotetor é de suma importância, pois a resposta é prática e objetiva, resposta essa que aumenta a taxa de sucesso experimental para a criopreservação, além de servir como referência para novos e mais refinados ensaios a serem desenvolvidos na área.Sperm cryopreservation has been successfully achieved for many aquatic species, especially fish. The use of powdered milk has shown to be an interesting alternative for sperm cryopreservation, and its use has shown good results after thawing for several species of fish. Zebrafish is a popular biological model for studies in several areas of research, presenting satisfactory particularities, so it is necessary to preserve the existing lineages. This thesis had as general objective to carry out a survey of the history and recent moment on the cryopreservation of semen in several species of fish, as well as to conceptualize a critical evaluation of the limitations, possible trends and paths to be followed in this area, in addition to performing the analysis of zebrafish sperm in contact with different cryoprotectants and equilibrium times, taking the structural, morphological and membrane integrity relationships of the sperm as a study tool. With the results found in the first study, it was possible to obtain detailed information about cryopreservation protocols, freezing rates and thawing methods, devices used, as well as the association of powdered milk with other cryoprotectants, in addition to conceptualizing a critical assessment of the limitations, possible trends and paths to be followed in the area of cryopreservation. From the results obtained, it was possible to observe that the inclusion of powdered milk in the cryoprotection of spermatozoa brought positive responses, showing satisfactory gains mainly for species belonging to the order Siluriformes and Cypriniformes. In the second study, it was observed that the treatment with a concentration of 10% methanol and 5 minutes of equilibrium was the most indicated, presenting better results for the sperm cryopreservation process. The evaluation of the simultaneity relationship between cryoprotectant factors, cryoprotectant concentration and cryoprotectant equilibrium time is of paramount importance, since the answer is practical and objective, a response that increases the experimental success rate for cryopreservation, in addition to serving as a reference for new and more refined tests to be developed in the area