MOLEKÜLER PATOLOJİ LABORATUVAR YÖNTEMLERİ VE BİYOİNFORMATİK YAKLAŞIM

Nükleik asitlerin izolasyonu, organik olarak bozulmaya uğramamış hücresel yapılardan özel solüsyonlar ve yöntemler kullanılarak bu moleküllerin ortayaçıkarılmasıdır. Başarılı bir moleküler analiz için ilkadım uygun miktarda ve kalitede nükleik asit eldesidir. Rutin patoloji pratiğinde tanı ve tedavi amacıylauygulanacak moleküler analizler için nükleik asit eldesi parafin bloklar, sitolojik preparatlar ve boyalıkesitlerden (Hematoksilen-Eozin, immünhistokimya ve histokimya boyalı kesitler) yapılabilir. Uygunhastalarda taze doku ve dolaşan tümör hücreleriniinceleyen likid biyopsi de tercih edilebilir.DNA izolasyonu emek gerektiren bir işlemdir. İzolasyon sonucunda uygun saflık ve konsantrasyondanükleik asit elde edilebilmesinde, doku ya da sıvılarıngeçirdiği preanalitik süreçlerin etkisi büyüktür. Kaliteli nükleik asit eldesi için doğru örnek seçimi çokönemlidir. İzolasyon işlemine başlarken hem RNAhem de DNA için önce uygun örnek seçilir ve hazırlanır, gerekiyorsa deparafinizasyon uygulanır. Bundansonra izolasyonun üç temel basamağı olan lizis, saflaştırma ve çökeltme aşamaları gerçekleştirilir. Buaşamalardan sonra konsantrasyon ve kalite ölçümleri yapılır.Bu bölümde moleküler patolojik değerlendirmelerinen temel aşamasındaki preanalitik ve analitik süreçlerle ilgili ayrıntılı bilgi verilmiş ve DNA-RNA izolasyon basamakları ayrıntılarıyla anlatılmıştır.