HASTALIKTA VE SAĞLIKTA HÜCRE ÖLÜMÜ Mekanizmaları ve Deneysel Modeller

Özet:İmmunblotlama proteinleri saptamak, analiz etmek ve ölçmek için geliştirilmiş analitik bir tekniktir. Bu yöntem, doku homojenatları ve hücre lizatları gibi karmaşık numunelerdeki spesifik protein moleküllerini saptamak için yaygın olarak kullanılmaktadır. İmmunoblotlama temel olarak jel elektroforezi ile protein kütlelerine göre ayırmayı ve ardından bir poliviniliden diflorür (PVDF) veya nitroselüloz membrana aktarmayı içermektedir. Proteinler membrana transfer edildikten kütle spektrometrisi veya immün deteksiyon yöntemiyle kantite edilebilir. İmmunoblotlama yönteminde, proteinler, spesifik antikorlara bağlanarak tanımlanmaktadır. Tipik olarak, bir birincil antikor, uygun bir substrat kullanılarak kemilüminesan veya kolorimetrik saptama için bir HRP- veya AP-konjuge ikincil antikor ile kombinasyon halinde kullanılmaktadır. Alternatif olarak, doğrudan görselleştirme için floresan olarak etiketlenmiş bir birincil veya ikincil antikor kullanılabilmektedir. Bu bölümde, western blot yöntemi basamak basamak detaylandırılmıştır.Anahtar kelimeler: immunblotlama, protein, elektroforez