Polimorfismo no gene da Ciclina D1 em neoplasias associadas a vírus

Dissertação de mestrado em Genética Molecular.A carcinogénese é um processo que envolve várias etapas e reflecte as alterações genéticas que promovem a transformação progressiva de células humanas normais em células altamente malignas. Nos últimos anos tem vindo a tornar-se clara a importância do estudo de genes de baixa penetrância, como os genes envolvidos na reparação de DNA e manutenção da integridade genómica, no controlo da proliferação e diferenciação celular ou no metabolismo de carcinogénios. A variação genética inter-individual pode constituir um factor importante na caracterização da susceptibilidade para o desenvolvimento de cancro. Pensa-se que algumas destas variantes genéticas podem ser definidas como alelos de susceptibilidade de baixa penetrância, conferindo um risco alterado para desenvolver cancro. Têm sido descritos muitos estudos relativamente à epidemiologia do cancro e aos efeitos carcinogénicos de microrganismos, nomeadamente os vírus. No caso de vírus que possuem a capacidade de persistir nas células que infectam, pensa-se que o mecanismo mais frequente resulta da alteração do controlo do ciclo celular e predisposição para modificações mais alargadas na expressão genética das células. A proteína ciclina Dl (CCND1) parece ser muito importante na regulação do ciclo celular, particularmente no ponto de controlo G1/S do ciclo celular. O gene CCND1 é um proto-oncogene mapeado no cromossoma llql3 muitas vezes alterado em diversos tipos de tumores. Foi identificado um polimorfismo no nucleótido 870 do gene CCND1, que consiste na transição das bases azotadas adenina e guanina no exão 4 do gene. Neste trabalho foi desenvolvido um estudo do tipo caso-controlo, com os objectivos de analisar a frequência do polimorfismo A870G no gene da ciclina Dl (CCNDJ) num grupo de indivíduos sem qualquer patologia, em mulheres com carcinoma do colo do útero e indivíduos com carcinoma da nasofaringe e verificar e avaliar a existência de associações entre a frequência do polimorfismo estudado e susceptibilidade genética para carcinoma do colo do útero e nasofaringe. Foram analisadas amostras de DNA correspondentes a quatrocentos e cinquenta e nove (459) indivíduos. O grupo de indivíduos controlo consistiu em cento e oitenta e sete (187) indivíduos normais sem patologia oncológica conhecida, constituído por cento e três (103) mulheres e oitenta e quatro (84) homens. Foram analisadas amostras de DNA de 178 mulheres com lesões colo do útero e 94 indivíduos com cancro da nasofaringe. A análise do polimorfismo e avaliação dos genótipos foi efectuada através da técnica PCR-RFLP. Através da análise dos resultados observou-se que mulheres portadoras do genótipo GG possuem um risco 3,67 vezes superior para o desenvolvimento de lesões de alto grau do colo do útero (OR=3,67; 95% CI 1,45-9,31; p=0,007) e 3,24 vezes superior para o desenvolvimento de carcinoma espinocelular do colo do útero (OR=3,24; 95% CI 1,41-7,46; p=0,006). Relativamente ao grupo de indivíduos com carcinoma da nasofaringe, a análise das frequências dos genótipos CCND1 indica que indivíduos portadores do genótipo GG possuem um risco acrescido no desenvolvimento de cancro da nasofaringe (OR=2,17; 95% CI 1,19-3,98; p=0,016) e um risco ainda superior quando analisados os resultados relativos ao tipo histológico indiferenciado (UCNT) em indivíduos portadores do genótipo GG (OR=2,32; 95% CI 1,20-4,17; p=0,0l8). Estes resultados podem ajudar na compreensão do papel e influência da ciclina Dl no cancro, dos mecanismos biológicos do cancro do colo uterino e da nasofaringe e na definição de um perfil genético para estas neoplasias.Tumorigenesis in humans is a multistep process and these steps reflect genetic alterations that drive the progressive transformation of normal cells into highly malignant derivatives. In the last few years low penetrance genes have been intensely studied, namely genes involved in DNA repair, genomic integrity maintenance, cell cycle control and metabolism of carcinogens. The genetic variation between individuals may be important in the characterization of cancer susceptibiiity. Some of these genetic variations can be defined as low penetrance susceptibility alleles, conferring an altered risk in cancer development. Many important discoveries relating to cancer epidemiology and to the carcinogenic effects of micro-organisms, namely virus, have been reported. The mechanism likely to occur more frequently is the imprinting of modified cell cycle control and predisposition to more extensive changes in cellular gene expression in the case of viruses that persist in the cells they infect. Cyclin Dl (CCND1) is a protein very important in cell cycle regulation, particularly in the Gl/S checkpoint of the cell cycle. CCNDJ is a proto-oncogene located on human chromosome llql3 often altered in many human tumors. A single nucleotide polymorphism at nucleotide 870 has been identified. We performed a case-control study, in order to analyze the frequency of the A870G CCND1 polymorphism in healthy individuals, women with lesions of the uterine cervix and individuals with nasopharyngeal carcinoma, and evaluate the possible associations between the frequency of the polymorphism and genetic susceptibility to cervical and nasopharyngeal cancers. We analyzed DNA samples of 459 individuals: 178 women with cervical lesions and 94 individuals with nasopharyngeal cancer. The control group consisted of 187 healthy individuals, including 103 women and 84 men. The analysis of the A870G polymorphism was performed by PCRRFPL techniques. The GG genotype was associated with a 3,67 fold higher risk for the development of high-grade lesions of the cervix (OR=3,67; 95% CI 1,45- 9,31; p=0,007) and a 3.24 fold increased risk for the development of squamous invasive cervical cancer (OR=3,24; 95% CI 1,41-7,46; p=0,006). Concerning the nasopharyngeal cancer group, the analysis of the frequencies of CCNDJ genotypes indicates that individuals carrying the GG genotype have a 2,17 fold increased risk for the development of nasopharyngeal cancer (OR=2,17; 95% CI 1,19-3,98; p=0,016) and a slightly higher susceptibility, with a risk of 2,32 fold (OR=2,32; 95% CI 1,20-4,17; p=0,018), when considering the undifferentiated histological type of nasopharyngeal carcinoma (UCNT). These results can lead to a better understanding of cyclin Dl influence in cancer, the biological mechanisms of cervical and nasopharyngeal cancers and in the definition of a genetic profile for these diseases.Liga Portuguesa Contra o Cancro. Núcleo Regional do Norte