Evaluation of bacterial isolates of marine origin, such as biological control agents for Microcyclus ulei, the cause of the disease South American Rubber Sheets - (SALB)

ilustraciones, fotografías, gráficas, tablasEvaluación de aislamientos bacterianos de origen marino, como agentes de control biológico de Microcyclus ulei, causante del Mal Suramericano de las Hojas del Caucho - (SALB) La producción de látex del árbol de caucho natural (Hevea brasiliensis), se ve afectada por fitopatógenos, como Colletotrichum gloeosporioides causante de la Antracnosis y Microcyclus ulei (P. Henn.) v. Arx (Ascomycota), causante del mal suramericano de la hoja del caucho (South American Leaf Blight - SALB). Esta última enfermedad, endémica amazónica, se encuentra distribuida en América Central y del Sur, siendo la mayor limitante para su cultivo con pérdidas anuales de 15% y 20% en producción y la muerte de árboles muy susceptibles. El control del SALB es limitado, basando en el control químico, con efectivos preventivos en viveros y jardines clonales, pero representa altos costos y causa impacto negativo al ambiente. En este trabajo de investigación, presentamos el control biológico como alternativa para el manejo del SALB, para ello se realizó un tamizaje a 50 aislamientos bacterianos procedentes de ambientes marinos, contra C. gloeosporioides. Los aislamientos bacterianos seleccionados, fueron evaluados para determinar la capacidad de inhibir la germinación de conidios de M. ulei, y aquellos que lo hicieron fueron probados en condiciones de invernadero, utilizando 20 plántulas del clon RRIM 600 de caucho natural H. brasiliensis, las cuales fueron inoculadas en tratamientos con patógeno y con biocontroladores. El aislamiento bacteriano 72, identificado como Stenotrophomonas maltophilia mediante secuenciación de 16s de rRNA presentó una alta capacidad en la disminución de los síntomas del SALB frente al control en condiciones de invernadero. Finalmente se evaluó la expresión diferencial mediante RT-qPCR de genes asociados a rutas de ácido jasmónico (AJ), ácido salicílico (AS) y actina en plántulas RRIM 600 infectadas con M. ulei y tratadas con filtrados bacterianos de S. maltophilia, obteniendo resultados que asocian el efecto de los tratamientos con posible inducción de Resistencia Sistémica adquirida (SAR). (Texto tomado de la fuente).Evaluation of bacterial isolates of marine origin, as biological control agents of Microcyclus ulei, the cause of the South American Disease of Rubber Leaves - (SALB) The production of latex from the natural rubber tree (Hevea brasiliensis) is affected by phytopathogens, such as Colletotrichum gloeosporioides, which causes Anthracnose, and Microcyclus ulei (P. Henn.) v. Arx (Ascomycota), the cause of South American rubber leaf disease (South American Leaf Blight - SALB). This last disease, endemic to the Amazon, is distributed in Central and South America, being the greatest limitation for its cultivation with annual losses of 15% and 20% in production and the death of highly susceptible trees. SALB control is limited, based on chemical control, with preventive measures in nurseries and clonal gardens, but it represents high costs and causes a negative impact on the environment. In this research work, we present the biological control as an alternative for the management of SALB, for which a screening was carried out on 50 bacterial isolates from marine environments, against C. gloeosporioides. The selected bacterial isolates were evaluated to determine the capacity to inhibit the germination of M. ulei conidia, and those that did so were tested under greenhouse conditions, using 20 seedlings of the RRIM 600 clone of natural rubber H. brasiliensis, were inoculated in treatments with pathogen and with biocontrollers. Bacterial isolate 72, identified as Stenotrophomonas maltophilia by 16s rRNA sequencing, showed a high capacity to reduce SALB symptoms compared to the control under greenhouse conditions. Finally, the differential expression was evaluated by RT-qPCR of genes associated with jasmonic acid (JA), salicylic acid (SA) and actin pathways in RRIM 600 seedlings infected with M. ulei and treated with bacterial filtrates of S. maltophilia, obtaining results that join the effect of treatments with possible induction of Systemic Acquired Resistance (SAR).Universidad Nacional de Colombia _ Instituto de Biotecnología - IBUNIncluye anexosMaestríaMagíster en Ciencias - MicrobiologíaSe realizó un tamizaje preliminar en condiciones in vitro mediante las técnicas de difusión en placa y enfrentamiento dual de 50 aislamientos bacterianos de origen marino contra Colletotrichum gloeosporioides, los aislamientos que presentaron mejor actividad antifúngica contra C. gloeosporioides fueron evaluados posteriormente en condiciones in vitro contra Pseucercospora ulei; mediante inhibición de la geminación de conidios. Los aislamientos que presentaron mayor porcentaje de inhibición de la geminación de conidios de P. ulei fueron evaluados en condiciones de invernadero mediante la inoculación de folíolos de clones RRIM600 de Hevea brasiliensis infectados con P. ulei y tratados con suspensiones y filtrados bacterianos del controlador aquí seleccionado. La posible inducción a resistencia sistémica adquirida (SAR) por parte del controlador 72 sobre las plántulas de caucho, fue evaluado mediante RT-qPCR donde se cuantificó la sobre expresión de genes asociados a altas concentraciones de ácido jasmónico y ácido salicílico. Se determinó la capacidad de colonización del aislamiento 72 sobre los folíolos de H. brasiliensis, a partir de inoculaciones de folíolos con suspensiones bacterianas obtenidas de medio LB líquido el cual se dejó crecer por 24 horas, los folíolos tratados fueron recuperados de las plántulas a las 24, 48, 72 y 96 horas después de la inoculación, para ser lavados con agua estéril y etanol al 70%, luego fueron macerados con agua estéril y la fase líquida obtenida fue inoculada en medio manitol e incubada a 28 ºC por 48 horas para el posterior recuento de las colonias bacterianas presentes en las placas de Petri tratadas.Caucho natural - Fitopatologí