Evaluation of expanded genetic panel based on next-generation sequencing in the analysis of genotype-phenotype correlation in multiple endocrine neoplasia type 1

A neoplasia endócrina múltipla tipo 1 (MEN1) é uma síndrome genética de herança autossômica dominante que predispõe ao risco aumentado de desenvolvimento de diversos tumores endócrinos e não endócrinos. É causada, principalmente, por mutação germinativa no gene MEN1 (11q13). Outros genes (CDKN2B/p15, CDKN2C/p18 CDKN1A/p21, CDKN1B/p27Kip1 e AIP) foram, posteriormente, relacionados ao fenótipo MEN1 em menos de 5% dos casos negativos para mutação germinativa MEN1. Pacientes com mutação nestes genes ou sem nenhuma mutação germinativa documentada são conhecidos como indivíduos MEN1(-). Nosso grupo de pesquisa padronizou e validou recentemente um mini painel genético baseado em sequenciamento paralelo em larga escala (NGS, Next Generation Sequencing) desenhado a partir de PCR longa (long range PCR) que proporcionou o sequenciamento completo (exons, fronteira intron-exon, regiões intrônicas profundas e região promotora) de todos estes genes simultaneamente (MEN1, CDKN2B/p15, CDKN2C/p18 CDKN1A/p21, CDKN1B/p27Kip1 e AIP). Estudos controversos e divergentes não têm sido capazes de documentar correlações entre casos com mutações no gene MEN1 (genótipo) e seu fenótipo. Mais recentemente, vem sendo mais bem delineada uma outra forma de análise de correlação genótipo-fenótipo em MEN1 caracterizada pelas diferenças clínicas e de evolução entre casos com e sem mutação germinativa MEN1. Tem sido demonstrado que indivíduos MEN1(-) tem peculiaridades fenotípicas e evoluções diferentes baseado em estudos com casuísticas limitadas e que não foram plenamente estudadas geneticamente. Neste estudo nós investigamos correlações genótipo-fenótipo em casos-índices clinicamente diagnosticados com MEN1 usando este mini painel de 6 genes baseado em PCR long range. A casuística foi constituída por 143 casos-índices com MEN1, sendo 87 deles portadores de mutação germinativa MEN1 e 56 casos-índices sem mutação germinativa MEN1, detectada por sequenciamento (Sanger/NGS) ou por MLPA (MEN1, CDKN1B/p27Kip1 e AIP). Destes 56 casos-índices, 40 deles eram também negativos para o mini painel NGS. Ao todo, 34 de 48 caraterísticas clínicas avaliadas eram diferentes (p45y eram MEN1(- ) (15). Casos MEN1(-) foram associados com probabilidade aumentada de associação HPT>45a/PIT >30a (30x), acromegalia (18x), HPT/PIT (18x), HPT>45a (16x), MEN1>45a (13x), e PIT>30a (4x). Além disso, durante o seguimento de 10,262±0,79 anos (SE) (8,85-11,67 anos), nenhum caso MEN1(-) foi diagnosticado com um 3o tumor relacionado à MEN1 (0/39 vs. 18/47, 38%; p45y were MEN1(-) (15). MEN1(-) cases were associated with higher probability of HPT>45yr/PIT >30yr (30-fold), acromegaly (18-fold), HPT/PIT (18-fold), HPT>45yr (16-fold), MEN1>45yr (13-fold), e PIT>30yr (4-fold). Also, during the follow-up (9.13+-7.38yr), no MEN1(-) case was diagnosed with a third MEN1 related tumor (0/39 vs. 18/47, 38%; p45yr; gender; three or two main tumors, adrenal tumor), useful to predict risk of presence/absence of MEN1 mutation from a given phenotype at the initial evaluation of index-cases clinically diagnosed with MEN1. No genotype-phenotype correlation was documented between 87 index-cases with MEN1 harboring pathogenic variants. However, it is possible that cases with large deletions are associated with more severe phenotype. We discriminated and refined the phenotypic differences and clinical evolution between index-cases harboring germline MEN1 mutation and MEN1 MEN1(-). It was possible to recognize and reveal the isolated and integrated risks of several clinical predictors to foreshadow both presence and absence of mutation and build a predictive probability model with potential application in clinical practice. The complete genetic analysis may help to identify candidate index- cases for Exome studies, better discriminate the phenotype differences between cases with or without known mutations and improve both genetic counselling and clinical management of the