Ensaios de citotoxicidade para investigação dos principais mecanismos de morte celular causados por compostos naturais e sintéticos no modelo de leucemias agudas

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2022.As leucemias mieloides agudas (LMA) são neoplasias hematológicas complexas e heterogêneas e seu tratamento ainda apresenta dificuldades na cura completa dos pacientes. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito citotóxico de quatro compostos naturais e 34 compostos sintéticos em linhagem de LMA, K562. Entre os compostos avaliados, a imidazopiridina DSH64 foi o que demonstrou maior citotoxicidade para essas células, avaliado pelo método do Brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT). Esse composto apresentou efeito citóxico concentração e tempo dependentes para as células K562, cujas CI50 foram de 51,88 ± 2,85 µM, de 19,68 ± 0,81 µM e 7,88 ± 0,28 µM, nos tempos de 24h, 48h e 72h, respectivamente. Já em células de fibroblasto humano, HS-5, o DSH64 apresentouCI50 de 24h de 98,33 ± 3,95 µM. A capacidade hemolítica do DSH64 foi avaliada em concentrações 10 x superiores à sua CI50 de 24h e não foi observada hemólise significativa. As alterações morfológicas visualizadas pela microscopia de fluorescência observadas com BE/LA após tratamento com CI50 de 24h do composto sugerem morte por apoptose. No entanto, não foram detectados exposição dos resíduos de fosfatidilserina por citometria de fluxo no tempo de 24h de incubação com o composto. Embora o DSH64 não tenha reduzido significativamente o ??m, houve aumento da expressão da proteína pró apoptótica Bax, da caspase -3, do FasR e aumento da relação Bax/Bcl-2, analisadas por citometria de fluxo, o que sugere o envolvimento da apoptose extrínseca. Os resultados também mostraram uma redução de survivina e aumento de EROs. Em conjunto, esses resultados sugerem que imidazopiridina DSH64 é um composto promissor para o desenvolvimento de um novo fármaco a ser utilizado no tratamento da LMA.Abstract: Acute myeloid leukemias (AML) are complex and heterogeneous hematological neoplasms and their treatment still presents difficulties in the complete cure of patients. Thus, the aim of this study was to investigate the cytotoxic effect of four natural compounds and 34 synthetic compounds on the AML strain, K562. Among the compounds evaluated, imidazopyridine DSH64 was the one that showed the highest cytotoxicity for these cells, evaluated by the 3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) method. . This compound showed concentration and time dependent cytotoxic effect for K562 cells, whose IC50 were 51.88 ± 2.85 µM, 19.68 ± 0.81 µM and 7.88 ± 0.28 µM, in 24h, 48h and 72h, respectively. In human fibroblast cells, HS-5, DSH64 showed a 24h IC50 of 98.33 ± 3.95 µM. The hemolytic capacity of DSH64 was evaluated at concentrations 10x higher than its 24h IC50 and no significant hemolysis was observed. The morphological changes visualized by fluorescence microscopy observed with BE/LA after treatment with 24h ED IC50 of the compound suggest death by apoptosis. However, exposure of phosphatidylserine residues by flow cytometry was not detected within 24 h of incubation with the compound. Although DSH64 did not significantly reduce ??m, there was an increase in the expression of the proapoptotic protein Bax, caspase -3, FasR and an increase in the Bax/Bcl-2 ratio, analyzed by flow cytometry, which suggests the involvement of apoptosis extrinsic. The results also showed a reduction in survivin and an increase in ROS. Taken together, these results suggest that imidazopyridine DSH64 is a promising compound for the development of a new drug to be used in the treatment of AML