Nitrosotióis, ácido ascórbico e dtnb nas alterações de reatividade vascular induzidas pela infusão de doador de óxido nítrico

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2019.A sepse é uma disfunção caracterizada por intensa resposta inflamatória e por aumento excessivo de óxido nítrico (NO) que pode causar prejuízo aos pacientes nas respostas à vasoconstritores, causando complicações em seu quadro. No presente trabalho objetivou-se avaliar se o aumento do NO é capaz de elevar a S-nitrosilação de proteínas e se o tratamento com o ácido ascórbico e o DTNB (5,5 - ácido ditionitrobenzóico) são capazes de reduzir essa condição e dessa forma apresentando o mecanismo de ação semelhante. Para isso foi realizada infusão com um doador de NO (nitroprussiato de sódio; SNP), por via endovenosa, pois este é capaz de promover redução da resposta a vasoconstritores. Em seguida se avaliou parâmetros como a pressão arterial média, fluxo sanguíneo renal, dosagem de metabólitos de NO e a S-nitrosilação de proteínas na aorta e no coração objetivando avaliar os efeitos promovidos pelo NO nesses parâmetros. A infusão com SNP reduziu a reatividade vascular à fenilefrina, porém nem o DTNB e nem o ácido ascórbico modificaram esta redução. A infusão com SNP não alterou o efeito da fenilefrina na redução do fluxo sanguíneo renal e, da mesma forma, nem DTNB e nem ácido ascórbico influenciaram este efeito. A S-nitrosilação foi aumentada na aorta dos animais infundidos e tanto o DTNB quanto o ácido ascórbico reduziram esta nitrosilação. Em contraste, não houve nitrosilação em coração. A adição de SNP diretamente em cortes de aorta e de coração de animais normais não aumentou a S-nitrosilação. Portanto, nossos resultados sugerem que: i) DTNB e ácido ascórbico compartilham o mesmo mecanismo de desnitrosilação de aorta e que ii) a perda do efeito vasoconstritor da fenilefrina em animais infundidos com SNP não parece envolver a formação de S-nitrosotióis.Abstract: Sepsis is a dysfunction characterized by an intense inflammatory response and an excessive increase in nitric oxide (NO), which can cause harm to patients in response to vasoconstrictors, causing complications in their condition. The objective of this study was to evaluate if the increase of NO is capable of raising S-nitrosylation of proteins and if the treatment with ascorbic acid and DTNB (5,5'-dithioitrobenzoic acid) are able to reduce this condition and thus presenting the similar mechanism of action. For this, infusion with a NO donor (sodium nitroprusside; SNP) was performed intravenously, as it is able to promote a reduction in response to vasoconstrictors. Afterwards, parameters such as mean arterial pressure, renal blood flow, NO metabolite dosage and S-nitrosylation of proteins in the aorta and in the heart were evaluated, aiming to evaluate the effects promoted by NO in these parameters. Infusion with SNP reduced vascular reactivity to phenylephrine, but neither DTNB nor ascorbic acid modified this reduction. Infusion with SNP did not alter the effect of phenylephrine on the reduction of renal blood flow and likewise neither DTNB nor ascorbic acid influenced this effect. S-nitrosylation was increased in the aorta of infused animals and both DTNB and ascorbic acid reduced this nitrosylation. In contrast, there was no nitrosylation in the heart. Addition of SNP directly to aorta and heart sections of normal animals did not increase S-nitrosylation. Therefore, our results suggest that: i) DTNB and ascorbic acid share the same mechanism of aortic denitrosylation and ii) the loss of the vasoconstricting effect of phenylephrine in animals infused with SNPs does not appear to involve the formation of S-nitrosothiols