Associação dos polimorfismos da região promotora, codificadora e 3' não traduzida do gene HLA-G com câncer de colo de útero

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2019O câncer de colo de útero (CCU), também conhecido como câncer cervical, é o terceiro tipo mais frequente na população feminina e a segunda causa de mortalidade de mulheres no mundo. O sistema imune tem um papel essencial no controle de neoplasias, que se desenvolvem através do mecanismo de escape tumoral. Um gene imunorregulador com papel nesse mecanismo é o HLA-G. Esse gene possui sítios de variação (SNV) em regiões regulatórias, 5´URR e 3´UTR. Além disso, apresenta variações em sua região codificadora, como a deleção que gera o alelo nulo G*0105N e impede a expressão de algumas isoformas proteicas. Essas SNV podem influenciar na expressão do gene. O presente estudo teve como principal objetivo avaliar associações de 20 SNV da 5?URR e 10 da 3?UTR, assim como a presença do alelo G*0105N,em mulheres que apresentavam lesão de colo de útero de alto grau (LCU) (n=28) e CCU (n=32), contrastados com dois grupos controle, mulheres sem a presença de LCU (SLU) (n=52) e um grupo populacional de mulheres sem evidência da doença (POP) (n=253), visando compreender o papel dessas SNV do HLA-G no desenvolvimento de LCU e de CCU. Após análises das sequências, foram realizadas cálculos de associação. Dez sítios da 5?URR apresentaram associação com a presença de LCU ou CCU, sendo eles: -725G>C>T, -689A>G, -646A>G, -509C>G, -477C>G, -443G>A, -400G>A, -391G>A, -369C>A e -284G>A. Os haplótipos 5'URR-6 e 5'URR-8 e as combinações haplotípicas 5'URR-1 + 5'URR-6, 5'URR-1 + 5'URR-9, 5'URR-4+5'URR-5, 5'URR-5+5'URR-7, 5'URR-5+5'URR-8, 5'URR-6+5'URR-6, 5'URR-6+5'URR-9, 5'URR-7+5'URR-8 e 5'URR-9+5'URR-9 foram associados ao risco de desenvolvimento de CCU. A combinação haplotípica 5'URR-1+5'URR-1 foi associada ao menor risco no desenvolvimento da doença. Para a 3?UTR, os sítios 14pbDel/In, +3001T/C, +3027A/C e +3196G/C apresentaram associação com suscetibilidade ou proteção ao CCU. O haplótipo UTR-1 foi associado ao menor risco para o desenvolvimento da doença e o UTR-2 como fator de risco para o CCU. O G*0105N foi detectado em três mulheres do grupo caso (CCU=2; LCU=1), sendo todas heterozigotas.Concluímos que há SNV de regiões regulatórias do HLA-G associadas ao maior ou menor risco para o desenvolvimento LCU e CCU. Assim, estudos de associação genética são importantes para identificação de SNV para futuros estudos funcionais.Abstract: Cervical cancer (CCU), also known as cervical cancer, is the third most frequent type in the female population and the second leading cause of death among women worldwide.The immune system plays an essential role in the control of neoplasias, which develop through the tumor escape mechanism.An immunoregulatory gene with role in this mechanism is HLA-G. This gene has variation sites (SNV) in regulatory regions, 5'URR and 3'UTR.In addition, there are variations in its coding region, such as the deletion that generates the null allele G * 0105N and prevents the expression of some protein isoforms.These SNVs may influence gene expression. The aim of the present study was to evaluate the associations of 20 SNV of 5'URR and 10 of 3'UTR, as well as the presence of the G * 0105N allele in women with high grade uterine cervix (LCU) lesion (n = 28) and CCU (n = 32), in contrast to two control groups, women without LCU (n = 52) and a population group of women with no evidence of disease (POP) (n = 253) aiming to understand the role of these HLA-G SNV in the development of LCU and CCU.After analysis of the sequences, association calculations were performed. Ten sites of 5'URR were associated with the presence of LCU or CCU, being: -725G> C> T, -689A> G, -646A> G, -509C> G, -477C> G, -443G> A , -400G> A, -391G> A, -369C> A and -284G. The haplotypes 5'URR-6 and 5'URR-8 and the haplotype combinations 5'URR-1 + 5'URR-6, 5'URR-1 + 5'URR-9, 5'URR-4 + 5'URR -5, 5'HRR-5 + 5'RHR-7, 5'RHR-5 + 5'RHR-8, 5'RHR-6 + 5'RHR-6, 5'RHR-6 + 5'RHR-9 , 5'URR-7 + 5'URR-8 and 5'URR-9 + 5'URR-9 were associated with the risk of developing CCU. The haplotypic combination 5'URR-1 + 5'URR-1 was associated with lower risk of disease development. For 3'UTR, the 14pbDel / In, + 3001T / C, + 3027A / C and + 3196G / C sites were associated with susceptibility or protection to CCU. The UTR-1 haplotype was associated with the lowest risk for the development of the disease and UTR-2 as a risk factor for CCU. G * 0105N was detected in three women in the case group (CCU = 2; LCU = 1), all of which were heterozygous. We conclude that there are SNV of HLA-G regulatory regions associated with greater or lesser risk of developing LCU and CCU. Thus, genetic association studies are important for the identification of SNV for future functional studies